Совместимость виноград и кефир: Какие продукты вредно употреблять с кефиром

Лист стевии: №

Хотя лист стевии не подвергается интенсивной переработке, как его жидкие или порошкообразные собратья, единственная цель листа стевии — подсластить то, что еще не было сладким.Это то, чего мы хотим, чтобы вы избегали во время проведения Whole30. Вместо этого научитесь ценить натуральный вкус своей еды и не полагаться на сладкий вкус, чтобы поддержать тягу к сахару.

Тахини — это паста из семян кунжута. Семена кунжута совместимы с программой Whole30, поэтому паста для тахини тоже подходит, , если , все остальные ингредиенты в пасте совместимы.

Экстракт ванили и другие растительные экстракты: Да

Растительные экстракты на спиртовой основе (например, ваниль, лимон или розмарин) разрешены во время программы Whole30.Эти экстракты используются для усиления вкуса пищевых продуктов и напитков, а также для консервирования некоторых пищевых продуктов, например мяса. Также подойдет дрожжевой экстракт. Он производится из дрожжей (грибков) и не содержит глютена.

Водный кефир: Да

Следуя той же логике, что и чайный гриб, мы не против водного кефира. Если вы делаете это самостоятельно, сделайте все возможное, чтобы сахар использовался бактериями (подходящее время ферментации). Если вы покупаете, избегайте тех брендов, в которых в списке ингредиентов есть сахар.

Изображения заголовков любезно предоставлены Мелом Джулваном и Paleo Spirit

Микробиологические, биохимические и функциональные аспекты ферментированных овощных и фруктовых напитков

В последние годы возрос спрос на функциональные напитки, способствующие укреплению здоровья и благополучия. Фактически, ферментированные соки являются отличным средством доставки биоактивных компонентов. Их производство имеет решающее значение для обеспечения пробиотиками, в частности, для людей с особыми потребностями, таких как потребители, страдающие аллергией на молочные продукты, и вегетарианцы.Этот обзор посвящен недавним открытиям, касающимся микробного состава и пользы для здоровья ферментированных фруктовых и овощных напитков молочнокислыми бактериями, кефирными зернами и SCOBY, а также обсуждению метаболитов, образующихся в результате этих процессов ферментации. Кроме того, также рассматриваются ограничения, которые могут ограничить их производство на промышленном уровне, и решения, которые были предложены для преодоления этих ограничений.

1. Введение

Сок определяется как «экстрагируемое жидкое содержимое тканей или клеток.«Каждый сок имеет определенные химические, питательные и сенсорные характеристики, в зависимости от типа используемых фруктов или овощей. Ruxton et al. [1] указали, что потребление фруктов и овощей или употребление их соков коррелирует со снижением риска хронических заболеваний. Овощные и фруктовые соки являются источниками многих биоактивных фитохимических веществ, таких как витамины, минералы и фенольные соединения [2]. Многие исследования показали, что существует корреляция между общим количеством фенолов и их антиоксидантной активностью [2].

Существенно изменились потребности потребителей в пищевой сфере. Потребители проявляют повышенный спрос на продукты и напитки, которые могут улучшить самочувствие, что способствует производству функциональной пищи. Хорошо известными примерами этих продуктов являются фруктовые и овощные соки с пробиотиками. Кроме того, эти напитки также полезны для людей с непереносимостью лактозы [3].

Ферментация считается недорогим процессом, который сохраняет пищу и улучшает ее питательные и сенсорные характеристики [4].Многие культуры использовались в качестве заквасок для ферментированных соков и признаны пробиотиками [4]. Кроме того, эти ферментации позволяют выводить на рынок новые продукты. Настоящая статья направлена ​​на обзор информации о ферментированных фруктовых и овощных напитках, которые обеспечивают хорошее здоровье, и исследует последние тенденции в этой области.

2. Состав и пищевая ценность фруктового и овощного сока

Фрукты и овощи представляют собой один из важнейших элементов сбалансированного питания и известны своей способностью укреплять здоровье человека.Их часто рассматривают как «функциональную пищу» из-за их содержания, богатого различными микроэлементами, такими как фенольные соединения (признанные, в частности, за их антиоксидантные свойства), минералы и витамины. Многие эпидемиологические исследования показали взаимосвязь между потреблением фруктов и / или овощей и профилактикой различных заболеваний, таких как рак, нейродегенеративные заболевания, ожирение и диабет [5].

По составу фрукты аналогичны овощам (таблица 1). Для них характерно очень важное содержание воды (в среднем 90%).Однако содержание углеводов в фруктах выше, чем в овощах. Органические кислоты являются вторым по распространению растворимым твердым компонентом соков, и они влияют на их сенсорные свойства. Основными кислотами являются яблочная и лимонная кислоты. Винная, глутаминовая, щавелевая и хинная кислоты также присутствуют в больших количествах во многих фруктах [11]. Кроме того, соки представляют собой важный минеральный источник (например, натрий, калий, железо, цинк, магний, фосфор, медь, кальций и марганец), способствуя кислотно-щелочному равновесию в крови и способствуя нейтрализации вредных реакций мочевой кислоты. [12, 13].

Основными фитохимическими веществами сока являются витамины, фенолы и пигменты, которые способствуют химиопрофилактике этих соков [14].Фенольные соединения имеют, как общую характеристику, наличие по крайней мере одного ароматического кольца, несущего один или несколько гидроксильных кластеров [14]. Их можно разделить на группы (таблица 2), согласно их химическому строению, в частности, количеству составляющих атомов углерода и основной структуре углеродного скелета [23].

Основными подтипами полифенолов являются флавоноиды, дубильные вещества и фенольные кислоты.Флавоноиды можно разделить на множество классов, таких как флавоны, флавонолы, изофлавоны, флаваноны и антоцианидины [24]. Они обладают мощной антиоксидантной активностью и проявляют защитное действие против многих хронических заболеваний и инфекционных [25]. Однако замена их гидроксильных групп снижает их эффективность [26]. Сообщается, что кверцетин является основным флавоноидом, принадлежащим к классу флавонолов. Признано, что улучшает психическое и физическое здоровье. Фактически, он обладает антиоксидантным, противодиабетическим, противовоспалительным и антипролиферативным действием [27].

Танины можно разделить на две основные группы: гидролизуемые и конденсированные танины [28]. Их антиоксидантная активность менее выражена, чем у флавоноидов, и это связано со степенью их полимеризации. Конденсированные и гидролизуемые дубильные вещества с высокой молекулярной массой обладают большей антиоксидантной активностью, чем простые фенолы [28].

Фенольные кислоты связаны с сенсорными, пищевыми и антимикробными свойствами фруктов и овощей [29]. Они обладают одной функциональной карбоновой кислотой и содержат две группы: гидроксибензойные кислоты и гидроксикоричные кислоты.Их антиоксидантная активность связана с количеством и положением гидроксильных групп в молекуле. Однако многие исследования показали, что антиоксидантная активность гидроксикоричных кислот выше, чем у соответствующих им гидроксибензойных кислот [30].

3. Ферментация сока

Помимо важного содержания питательных веществ, фруктовые и овощные соки представляют собой новое средство передачи пробиотиков. Их содержание углерода может способствовать росту культуры и развитию привлекательных вкусовых профилей.Эти микроорганизмы также могут улучшить свои физико-химические свойства и содержание питательных веществ. Кроме того, ферментация увеличивает срок их хранения и безопасность.

3.1. Ферментация сока молочнокислыми бактериями

Молочнокислые бактерии (LAB) широко используются при ферментации пищевых продуктов. Их использование улучшает органолептические характеристики и пищевую ценность ферментированных продуктов. Во время ферментации LAB превращает неперевариваемые вещества в другие, которые легче перевариваются, и производит различные противомикробные соединения.Некоторые из этих бактерий называются «пробиотиками» и, как известно, обладают свойствами, способствующими укреплению здоровья [31].

Различные исследователи изучали пригодность фруктовых и овощных соков для создания пробиотических напитков. Reid et al. [32] показали, что потребление ферментированных напитков увеличивает общее количество LAB в кишечном тракте, что помогает в повышении иммунитета против распространенных патогенов. Среди всех LAB Lactobacillus plantarum является наиболее часто используемым видом для овощной ферментации.LAB используют источники углерода и свободные аминокислоты, присутствующие в среде, для производства представляющих интерес метаболитов [33]. Молочная кислота является основной органической кислотой, продуцируемой LAB, и она играет роль в снижении секреции провоспалительных цитокинов активированных Toll-подобных рецепторов (TLR-) макрофагов и дендритных клеток костного мозга в зависимости от дозы. [34]. Помимо продукции органических кислот, синтезируются многие вторичные метаболиты, такие как биоактивные пептиды, жирные кислоты, экзополисахариды и витамины [35, 36].LAB также увеличивают антиоксидантную активность ферментированных продуктов благодаря активности таких ферментов, как β -глюкозидаза и эстераза [37, 38]. Кроме того, производные фенола обычно являются источником аромата конечных продуктов [38].

Несколько субстратов для сока ферментируют с использованием LAB (Таблица 3). Томатный сок использовали в качестве субстрата для LAB Yoon et al. [48] ​​и Kaur et al. [49]. Они обнаружили, что LAB могут использовать фруктовые соки для синтеза своих клеток. Они пришли к выводу, что превращение LAB в кислый сок может помочь им выжить в желудочно-кишечном тракте.Капуста, помидоры, кабачки и тыквенные соки также использовались для производства ферментированных напитков [50]. Рост LAB снижает pH сока и увеличивает концентрацию молочной кислоты. Кроме того, в конечных продуктах содержится от 43% до 56% исходного содержания L-аскорбиновой кислоты. Капуста и кабачки оказались наиболее подходящими для создания этих пробиотических напитков. Kohajdová et al. [51] изучали ферментацию огуречного сока с добавлением 0,5%, 1% и 2% лукового сока на фунтов.Подорожник . Они отметили, что присутствие лука в соке усиливает выработку органических кислот на начальных этапах ферментации. Однако наблюдалось небольшое ингибирующее действие лука, особенно при повышенном соотношении лук / огурец, в дальнейшем ходе ферментации.

В другом исследовании Reddy et al. [52] исследовали ферментацию сока манго четырьмя LAB ( Lb. Acidophilus, Lb. delbrueckii, Lb. plantarum и Lb.Касеи) . Они пришли к выводу, что четыре бактерии смогли противостоять ферментированным сокам и выжить в них в течение 4 недель хранения при 4 ° C. Такой же результат наблюдали Nagpal et al. [53], когда они использовали фунтов. plantarum и фунтов. Acidophilu s для ферментации апельсинового и виноградного соков. Однако когда Lb. plantarum, Lb. delbrueckii, Lb. Paracasei и фунтов. Acidophilus использовались для ферментации гранатового сока, всего фунтов. plantarum и фунтов.delbrueckii смогли выжить после двух недель хранения при 4 ° C, и ни один из них не выжил после четырех недель. Недавно Mantzourani et al. [42] упомянули, что иммобилизация Lb. Paracasei на пшеничных отрубях повысил их жизнеспособность во время хранения при 4 ° C на ферментированном напитке из кизиловой вишни.

Красная свекла также использовалась для производства функционального напитка, сброженного путем сокультивирования фунтов. Acidophilus и Lb. plantarum [40].Они наблюдали усиление некоторых биологических активностей, таких как увеличение концентрации полифенолов и антибактериальную активность против Listeria monocytogenes . Сообщалось также о 64% ​​цитотоксической активности против клеток рака печени человека Hep G2. Считалось, что увеличение количества фенольных соединений связано с их деполимеризацией в более биодоступные простые соединения [54]. О высвобождении фенольных кислот также сообщалось в исследовании Ryu et al. [55]. Они показали, что содержание фитохимических веществ увеличивалось по мере развития ферментации.В эти механизмы гидролиза вовлечены несколько ферментов, таких как гликозилгидролазы, эстеразы, декарбоксилазы фенольных кислот и редуктазы. Эти индуцируемые ферменты рассматриваются как специфическая реакция на химический стресс для преодоления токсичности фенольной кислоты [56]. В сброженном вишневом соке на фунтов. plantarum, наблюдались превращение кофейной и п-кумаровой кислот и накопление восстановленных производных (дигидрокафеиновая кислота и флоретиновая кислота) [38]. В другом исследовании было отмечено увеличение количества катехоловой, протокатехиновой, хлорогеновой, галловой и сиреневой кислот в сброженном соке [55].Однако молочнокислое брожение не увеличивает все фенольные соединения. Уменьшение содержания гидроксибензойной и гидроксикоричной кислот наблюдалось в сброженном соке бузины [38], что может быть связано с их декарбоксилированием или гидрированием редуктазами фенольной кислоты. Штаммы Lb. rossiae , фунтов. brevis и фунтов. curvatus , как было установлено, способны метаболизировать гидроксикоричные кислоты путем декарбоксилирования или восстановления [57]. Также предполагалось, что гидроксикоричные кислоты могут использоваться LAB в качестве внешних акцепторов электронов для получения одного дополнительного моля АТФ [58].

Помимо фенольных кислот, увеличение содержания флавоноидов также наблюдалось при ферментации сока кешью [41], Momordica charantia [43] и шелковицы [44] до фунтов. plantarum. Специфические гликозилгидролазы ответственны за восстановление гликозидов флавоноидов до их агликонов [59]. McCue et al. [60] сообщили, что фенольные агликоны обладают более высокой антиоксидантной активностью, чем их гликозиды, и быстрее всасываются в кишечнике, чем их связанные с глюкозидом формы.

Значительное увеличение концентрации эллаговой кислоты было замечено во время ферментации гранатового сока на фунтов. plantarum [46]. Эллаговая кислота известна как мощный антиоксидант и противоопухолевое соединение, и ее высвобождение может быть связано с гидролизом эллагитаннинов [46]. Сообщается, что фунтов. plantarum может разлагать танины с помощью танинацилгидролазы, называемой танназой [61]. Эта эстераза может гидролизовать сложноэфирные связи, присутствующие в галлотаннине, таниновых полимерах и сложных эфирах галловой кислоты, избегая их полимеризации и придавая соку высокое содержание ароматических соединений и соответствующий цвет [62].Кроме того, танназа может изменять фенольный состав соков и увеличивать их антиоксидантную и антипролиферативную активность [63].

Напротив, Такур и Джоши [39] заметили снижение содержания полифенолов в яблочном соке, сброженном на фунтов. plantarum и S. thermophilus из-за превращения некоторых фенольных соединений. Концентрация фенольных соединений в соке папайи также снижается после ферментации [64]. Это снижение могло быть результатом осаждения фенольных соединений и / или их адсорбции белками или клетками [65].Однако Такур и Джоши [39] сообщили, что уменьшение количества фенольных соединений может улучшить усвояемость белков и углеводов. Следовательно, влияние ферментации на фенольные соединения, по-видимому, в значительной степени зависит от используемого штамма и сырья.

Антиоксидантная эффективность ферментированных соков LAB обычно увеличивается с увеличением общей концентрации фенольных соединений, и это связано с их химической структурой; однако зависимость не линейная. Ох и др.[54] показали повышение антиоксидантной активности, несмотря на снижение общего количества фенольных соединений. Кроме того, снижение pH ферментированных соков могло стабилизировать фенолы, что привело к более высоким уровням активности по сравнению с неферментированными соками [44]. Тем не менее, снижение активности по улавливанию радикалов DPPH ферментированных морковных соков с Lb. rhamnosus был отмечен Nazzaro et al. [66, 129].

Рост LAB на соках привел к изменению вкусовых характеристик [41].Сенсорные свойства сброженных соков являются результатом молекул и метаболитов, образующихся во время ферментации (экзополисахарид, ароматические соединения и органические кислоты). Ароматические соединения, образующиеся во время ферментации, могут включать спирты, альдегиды, кетоны, сложные эфиры или жирные кислоты, полученные в результате катаболизма углеводов, белков и жиров в соке. Молочная ферментация томатного сока привела к образованию ароматических соединений, таких как спирты, сложные эфиры, кетоны, алканы и терпены [66, 129].Filannino et al. [46] обнаружили, что количество летучих свободных жирных кислот увеличивается во время ферментации и хранения гранатового сока на фунтов. Подорожник . Такие же результаты наблюдали Ricci et al. [33] во время ферментации сока бузины на фунтов. Подорожник . Однако некоторые исследователи показали, что пробиотики могут отрицательно влиять на сенсорные свойства некоторых ферментированных соков. Чтобы улучшить их общее восприятие, Luckow et al. [67] предложили дополнить эти напитки соками из тропических фруктов, такими как ананас в концентрации 10%.

3.2. Ферментация сока зернами кефира

Зерна кефира состоят из белых или желтых нерегулярных гранул белка и полисахаридной матрицы, называемой кефираном [68]. Он способствует укреплению здоровья и может изменять состав и активность кишечной микробиоты [69].

Закваска состоит из симбиотического консорциума нескольких дрожжей и бактерий. LAB представлены родами Leuconostoc, Lactobacillus, Streptococcus и Lactococcus, , а дрожжи включают роды Saccharomyces, Zygosaccharomyces spp., Dekkera, Candida, Kluyveromyces и Pichia [69]. Бактерии уксусной кислоты были выделены также из кефира [70]. Среди различных бактерий и дрожжей, обнаруженных в кефире, некоторые из них признаны пробиотиками [71]. Отношение количества жизнеспособных LAB к количеству дрожжей в зерне (2 LAB / 10 дрожжей) относительно постоянно в течение всей ферментации [72]. В этих отношениях дрожжи производят важные факторы роста бактерий. Однако чрезмерный рост бактерий подавляет рост дрожжей [73].Доля микроорганизмов в зернах отличается от таковой в ферментированном продукте из-за многих параметров, таких как тип субстрата, время ферментации, температура инкубации, скорость перемешивания, соотношение посевного материала и условия хранения [70, 74, 75]. Продовольственная и сельскохозяйственная организация (ФАО) и Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) рекомендуют, чтобы кефир содержал минимум 10 ⁷ КОЕ / мл микроорганизмов, а конечный продукт должен содержать не менее 10 ⁴ КОЕ / мл дрожжей. [76].

Некоторые фруктовые и овощные соки ферментировались кефирными зернами (Таблица 4). Конечные продукты слабо карбонизированы и характеризуются наличием органических кислот, низким содержанием алкоголя и множеством вкусовых добавок [68, 78]. Желаемый вкус напитка обусловлен летучими эфирами, которые образуются в результате реакции кислот со спиртами.

Соки из яблок, айвы, винограда, киви, опунции и граната использовали Randazzo et al.[68] для производства кефирных напитков. Результаты показали, что в этих ферментированных соках могут расти как LAB, так и дрожжи, но самый высокий уровень микроорганизмов был достигнут с фруктовым соком опунции. Содержание этанола в ферментированных напитках выше 1,2% (об. / Об.), За исключением напитка, полученного из киви. S. cerevisiae является основным видом, ответственным за производство алкоголя. Некоторые исследователи показали, что виды в пределах рода Lactobacillu s могут производить этанол благодаря ферменту алкогольдегидрогеназа, который может преобразовывать ацетальдегид в этанол [79].Было доказано, что ферментированные соки киви и граната обладают наивысшей антиоксидантной активностью. Однако больше всего дегустаторы оценили кефирные напитки из яблок и винограда. Ферментация гранатового сока в качестве единого или смешанного субстрата с апельсиновым соком с использованием кефирных зерен была предложена Kazakos et al. [80]. Они показали, что добавление апельсинового сока улучшает способность кефирных зерен сбраживать гранатовый сок. Более того, было показано, что все напитки на основе кефирного сока обладают высокой питательной ценностью, обусловленной как субстратом с важным антиоксидантным потенциалом, так и культурой, обладающей пробиотическими свойствами.Сообщалось, что ферментация кефиром может повысить уровень общего содержания фенолов [81, 82]. Это увеличение связано с метаболической активностью микроорганизмов в кефирных зернах. Во время ферментации ферменты, такие как β -гликозидаза, полученные из ферментативных микроорганизмов, ответственны за гидролиз сложных фенольных соединений и увеличение общего количества фенолов. Кроме того, ферментация с кефирными зернами оказала положительное влияние на улавливание радикалов DPPH.Синергетический эффект фенольных соединений с производными соединениями во время ферментации, по-видимому, улучшает антиоксидантную активность сброженных соков. Lin и Yen [83] указали, что многие штаммы LAB обладают антиоксидантной способностью. Фактически, они могут детоксифицировать активные формы кислорода благодаря антиоксидантным ферментам (таким как супероксиддисмутаза и пероксидаза) и способны хелатировать ионы металлов и улавливать активные формы кислорода [84]. Связь между механизмами окислительно-восстановительной регуляции и продукцией экзополисахаридов (EPS) была также показана Zhang и Li [85].Развитие антиоксидантной активности является специфической характеристикой штамма [86].

Corona et al. [77] разработали кефирные напитки с использованием морковного, фенхеля, дыни, лука, томатов и клубничного сока. Процесс ферментации вызвал уменьшение содержания растворимых твердых веществ и увеличение количества летучих соединений. Высокие количества сложных эфиров были получены в напитках из клубники, лука и дыни; и увеличение количества терпенов было зарегистрировано в ферментированных соках моркови и фенхеля. Напитки, полученные из клубничного, лукового и томатного соков, сохранили важную антиоксидантную активность.Однако больше всего судьи оценили морковно-кефирный напиток.

Терапевтические аспекты этих напитков оценивались многими исследователями, и были обнаружены многие биоактивные соединения, такие как биоактивные пептиды и экзополисахариды [70, 87–89]. Эти биоактивные соединения обладают множеством эффектов, таких как противовоспалительное, антиульцерогенное, антиоксидантное и рубцовое действие.

Напитки на кефире обладают также антибактериальными свойствами благодаря сочетанию нескольких факторов, таких как органические кислоты и бактериоцины, образующиеся в процессе ферментации.Эта активность была эффективна в отношении различных видов патогенных бактерий [89].

3.3. Ферментация сока с помощью SCOBY

Напиток чайный гриб обычно готовят из черного или зеленого чая. Чайные листья богаты полифенолами и обеспечивают количество азота, необходимое для роста микроорганизмов. Echinacea purpurea L. tea и лимонный бальзам также использовались для ферментации чайного гриба, и полученные напитки обладают выдающимися антиоксидантными свойствами [90, 91].

Напиток из чайного гриба готовится симбиотическим консорциумом уксуснокислых бактерий и дрожжей, известным как SCOBY [92]. ЛАБ были также выделены из некоторых напитков из чайного гриба [93]. Основными уксусно-кислыми бактериями, выделенными из чайного гриба, являются Komagataeibacter xylinus , который, как известно, продуцирует целлюлозу в культуре, Gluconacetobacter europaeus, Gluconobacter oxydans, Gluconacetobacter saccharivorans, Gluconacetobacter entaniicedocharivorans, Gluconacetobacter entaniicedobacteris, Gluconacetobacter entanii, Gluconacetobacter. rhaeticus [94–96].В другом исследовании Marsh et al. [97] указали, что доминирующие бактерии, обнаруженные в пяти образцах чайного гриба, принадлежат к видам Gluconacetobacter и Lactobacillus , а концентрация Acetobacter была ниже 2%.

Основные идентифицированные дрожжи соответствовали Saccharomyces, Brettanomyces, Dekkera, Hanseniaspora и Zygosaccharomyces [94, 96]. Многие типы этих дрожжей упоминаются как потенциальные пробиотики, такие как S.cerevisiae [98]. Фактически, Javmen et al. [99] показали, что глюкановые полисахариды из стенок S. cerevisiae играют роль в стимуляции иммунной системы и адсорбции токсичных веществ. Дрожжи производят этанол и диоксид углерода из фруктозы и глюкозы [100]; а уксуснокислые бактерии превращают глюкозу в глюконовую кислоту и фруктозу в уксусную кислоту. Полученная уксусная кислота стимулирует выработку этанола дрожжами [100]. Известно, что этанол и уксусная кислота обладают хорошей антибактериальной активностью в отношении патогенов [101].

Несколько факторов могут повлиять на микробный и биохимический состав напитка из чайного гриба; один из них — температура. Согласно Fu et al. [102], хранение чайного гриба при 4 ° C в течение 14 дней несколько снижает содержание уксуснокислых бактерий и значительно снижает содержание LAB. Neffe-Skocińska et al. [103] показали, что оптимальными условиями для ферментации чайного гриба являются температура 25 ° C и период в 10 дней. Однако Ayed et al. [104] показали, что шести дней ферментации достаточно, чтобы улучшить питательные и сенсорные характеристики красного виноградного сока, сброженного с помощью SCOBY.Исследование среды для ферментации, богатой антиоксидантами, привело к новым тенденциям в исследованиях. Действительно, использование фруктового сока в качестве субстрата для SCOBY улучшает питательный эффект полученного напитка. Благоприятные эффекты чайного гриба обусловлены, среди прочего, его кислотным составом, таким как глюконовая, глюкуроновая, уксусная и молочная кислоты [105, 106]. Концентрация кислот зависит как от времени ферментации, так и от типа субстрата, используемого для приготовления напитка.

Экстракт клубней топинамбура использовали в качестве субстрата для SCOBY [107, 108].Полученный напиток имел высокое содержание L-молочной и L-аскорбиновой кислоты и считался диетическим продуктом из-за присутствия инулоолигосахаридов. Однако недостатком этого напитка является отсутствие глюкуроновой кислоты и горький вкус [107].

Соки вишни, винограда и граната, являющиеся источником биологически активных ингредиентов, также использовались для производства функциональных напитков с высоким содержанием глюкуроновой кислоты [109–111]. Глюкуроновая кислота — один из самых ценных для здоровья компонентов чайного гриба, обладающий детоксицирующим действием [112].Глюкуроновая кислота также является предшественником витамина С [113] и участвует в профилактике хронических дегенеративных сердечно-сосудистых и нейродегенеративных заболеваний и рака [92, 100]. Максимальный выход глюкуроновой кислоты был получен на соках вишни и граната с добавлением 0,8% сахарозы [109–111] и на виноградном соке с добавлением 0,7% сахарозы [110]. Выход глюкуроновой кислоты, полученной на разных соках, был выше, чем на черном чае. Это увеличение объяснялось высоким содержанием углеводов в этих соках.Yavari et al. [110] показали корреляцию между повышением температуры с 27 ° C до 37 ° C и увеличением содержания глюкуроновой кислоты. По мнению исследователей, полученные напитки могут иметь высокую фармацевтическую ценность.

Многие авторы отметили увеличение общего содержания фенолов и антиоксидантной активности во всех средах, используемых для ферментации чайного гриба. Увеличение общего количества фенольных соединений можно объяснить разложением полифенольных комплексов, как следствие повышенной кислотности во время ферментации, а также ферментами, продуцируемыми консорциумом чайного гриба [114].Польза для здоровья напитка чайного гриба также связана с его антиоксидантной активностью. Известно, что антиоксиданты предотвращают многие нарушения и метаболические заболевания, вызванные окислительным стрессом [115, 116]. Айед и Хамди [117] показали, что антиоксидантный потенциал сока кактусовой груши, сброженного с помощью SCOBY, значительно увеличился в результате ферментации. Эти результаты сопоставимы с результатами, полученными Ayed et al. [104] и Khosravi et al. [118], которые использовали в качестве субстратов виноградный сок и финиковый сироп соответственно.Повышение антиоксидантной активности кефирного напитка объясняется суммой антиоксидантной активности многих соединений, присутствующих в фруктах, синергическим действием между определенными продуктами метаболизма, образующимися во время ферментации, и некоторыми пептидами, выделяемыми дрожжами во время автолиза. Jaehrig et al. [119] показали, что антиоксидантная активность дрожжей, как полагают, в основном обусловлена ​​высоким содержанием β -глюканов, обнаруженных в их клеточных стенках, а также белков стенок; однако антиоксидантная активность белков значительно превышает активность β -глюкана.

Противомикробная активность SCOBY была доказана против нескольких патогенов [101, 104, 117, 120]. Это связано с фенольными соединениями и присутствием органических кислот, ответственных за снижение рН цитоплазмы. Подкисление цитоплазмы бактерий может предотвратить рост за счет ингибирования гликолиза и предотвращения активного транспорта [120].

4. Возможности и проблемы для производства функциональных соков

Задача промышленного производства функциональных напитков состоит в выборе закваски, которая воспроизводит специфические характеристики напитка, полученного путем спонтанного брожения.К сожалению, спонтанная микрофлора может вызвать появление органолептических нарушений и не может гарантировать безопасность. Использование отобранных штаммов по их технологическим и функциональным свойствам является привлекательным подходом для воспроизведения традиционных напитков для массового производства и стандартизации их органолептических характеристик. Однако их использование может сопровождаться потерей типичности.

Функциональность этих напитков обусловлена ​​наличием пробиотических микроорганизмов и образующихся метаболитов.Тем не менее, существуют некоторые ограничения, которые могут ограничить их производство на промышленном уровне, а именно поддержание жизнеспособности и активности этих заквасок в конечных продуктах до конца их срока годности [4]. Однако Ranadheera et al. [121] обнаружили, что включение LAB в кислые фруктовые соки может улучшить их устойчивость к последующим стрессовым кислым условиям.

Некоторые исследователи предложили некоторые решения для защиты клеток от стресса. Ракин и др.[13] предложили добавление дрожжевого автолизата к соку для увеличения количества бактерий и производства молочной кислоты во время ферментации. В других исследованиях было показано, что обогащение фруктовых соков пребиотиками повышает жизнеспособность пробиотических культур. По данным Saarela et al. [122], добавление овсяной муки в сок может повысить его стойкость во время хранения сока при низком pH. Такие же результаты были получены Уайт и Хекма [123], когда они изучали жизнеспособность пробиотических бактерий в присутствии галактоолигосахаридов.Методы микрокапсулирования и наноинкапсулирования также могут использоваться для защиты бактерий от кислой среды. Важность систем инкапсуляции для обогащения и консервирования фруктовых соков была в значительной степени продемонстрирована в обзоре Ephrem et al. [124].

Новое направление в производстве соков — добавление нескольких биоактивных компонентов. Ахмад и Ахмед [125] обсуждали в своем обзоре потенциал наиболее важных побочных продуктов переработки овощей как источника ценных соединений для обогащения напитков.Например, смешивание соответствующего количества побочного продукта с фруктовыми или овощными соками можно рассматривать как хороший подход для решения проблемы обогащения соков и удаления отходов. Сырная сыворотка входит в число этих побочных продуктов, которые успешно используются благодаря своим важным характеристикам. Это источник белков, которые имеют наивысшую биологическую ценность среди всех белков, присутствующих в пище [126]. Использование ферментированной сыворотки и фруктовых напитков в качестве носителя для пробиотических бактерий является предметом большого количества публикаций в последние годы [127, 128].Кроме того, добавление сыворотки к соку позволило увеличить рост полезных бактерий и повысить пробиотические свойства конечных продуктов.

5. Заключение

Исследования показали, что фруктовые и овощные соки привлекают все больше внимания из-за их пищевой ценности и их полезных свойств, особенно ферментированных, поскольку они могут служить подходящими носителями для пребиотиков и пробиотиков. Наряду с их высокой антиоксидантной активностью, эти ферментированные напитки имели пониженное содержание сахара, что является реальным дополнением с точки зрения питательных качеств, особенно для людей с диабетом .

Смешанные ферментации с высокой вариабельностью усложняют конечный продукт, но их трудно контролировать. Вот почему их обычно заменяют чистым выращиванием для достижения крупномасштабного производства. Другими проблемами остаются поддержание жизнеспособности пробиотиков в конечных продуктах во время их производства и в течение всего срока их хранения. Комбинация ферментации с новыми методами, такими как обогащение сока некоторыми ингредиентами или инкапсуляция, может считаться успешной стратегией для решения этой проблемы.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

органический виноград сухой органический виноград несульфурированный | Natural-Kefir-Drinks

✔ Гарантированная совместимость наших культур кефира и чайного гриба с нашими сухофруктами
✔ Оптимальная адаптация сухофруктов к нашим сертифицированным культурам
✔ Простое приготовление вкусных кисломолочных напитков благодаря проверенной пригодности наших сухофруктов.

Это предложение включает

Средняя пищевая ценность (в 100 г)

• Энергия (в кДж): 1285

• Энергия (в ккал): 307

• Жиры: 0,7 г, из них насыщенные жирные кислоты: 0,2 г

• Углеводы: 70,1 г — из них сахар: 70 г

• Пищевые волокна: 4 г

• Белки: 3,1 г

• Соль: 0,04 г

Аллергены

В соответствии с постановлением ЕВРО 1169/2011 аллергены не содержатся.

Использование

Это высококачественный органический виноград сорта Томпсон Сидлесс, созревающий в отличных условиях.Для региона характерно много часов солнечного света. Помимо достаточного полива, виноград оптимально раскрывает свой мягкий вкус и приятный вкус. Вы можете использовать этот восхитительный виноград для выпечки тортов, приготовления вкусных блюд и, конечно же, для производства ценной водной кефирной соды, лимонада из корня имбиря и чая чайного гриба.

После вскрытия хранить продукт в сухом и прохладном месте.

Более подробную информацию о винограде и его использовании можно найти здесь здесь .

Подробнее об этом читайте в нашей статье «Подходящие сухофрукты для водного кефирного лимонада и лимонада из корня имбиря» на сайте www.gesundheitsgeber.de

Состав

• сушеный виноград *, растительное масло *: подсолнечное масло * или пальмовое масло * (* из сертифицированного органического сельского хозяйства)

Информация:
Качество: 100% органическое
Происхождение: DE-ÖKO-012 Аргикультура, не входящая в ЕС
Контрольный орган: DE-ÖKO-012 | AGRECO
Номер артикула: 446002

Дополнительная информация

На нашей информационной платформе Gesundheitsgeber мы предоставляем еще больше информации о винограде и сухофруктах, а также о сухофруктах в целом.де. Просто нажмите здесь.

Доставка

Доставка будет осуществляться в стабильных и безопасных для пищевых продуктов полиэтиленовых пакетах. Эти пакеты, конечно же, не содержат бисфенол-А.

Рост и автолиз кефирных дрожжей Kluyveromyces marxianus в лактатной культуре

Штамм дрожжей и условия культивирования

Штамм K. marxianus Bot3 + 7 был выделен из домашнего кефира на Тайване. Сначала дрожжи предварительно культивировали в течение 2 дней при 30 ° C с вращением при 120 об / мин в среде YPD, содержащей 10 г дрожжевого экстракта, 20 г пептона и 20 г глюкозы на литр дистиллированной воды.Для измерения роста и высвобождения белка предварительно культивированные клетки из двухдневной культуры разводили 1: 100, добавляя 30 мкл суспензии к 3 мл среды YNL (синтетическая среда, состоящая из 6,7 г дрожжевого азотистого основания без аминокислот ( Difco, Детройт, штат Мичиган, США) и 20 г молочной кислоты (JT Baker, Филипсбург, штат Нью-Джерси, США) на литр дистиллированной воды) или YNG, глицериновая среда (синтетическая среда, состоящая из 6,7 г дрожжевого азотистого основания без аминокислот ( Difco, Детройт, Мичиган, США) и 16 г глицерина (Union Chemical Works, Hsinchu City, Тайвань) на литр дистиллированной воды).PH среды регулировали добавлением NaOH (Showa, Tokyo, Japan). Все дрожжевые культуры инкубировали при 30 ° C во вращающемся инкубаторе (120 об / мин). В среду добавляли MgCl ₂ , как указано в рукописи. Для определения жизнеспособности клеток использовали метод колониеобразующих единиц (КОЕ). Клетки дрожжей в культуральной среде суспендировали в стерильной воде и разбавляли до конечной концентрации примерно 10 ³ клеток / мл. 150 мкл образца суспензии высевали на твердую среду YPD и инкубировали при 37 ° C.КОЕ подсчитывали через 48 ч инкубации. Для анализа общего содержания белка методом ЖХ-МС / МС предварительно культивированные клетки разбавляли добавлением 3 мл суспензии к 300 мл среды YNL (pH 5,44) и инкубировали при 30 ° C в инкубаторе с встряхиванием (120 об / мин) в течение Анализ белков ЖХ – МС / МС.

Мультилокусное типирование последовательностей

Геномную ДНК дрожжей экстрагировали с помощью набора FavorPrep Fungi / Yeast Genomic DNA Extraction Mini Kit (Favorgen, Тайвань) в соответствии с инструкциями производителя.Выход ДНК определяли с помощью микро-спектрофотометра Nano-100 (Medclub Scientific Co., Ltd., Тайвань). Всего 10 нг геномной ДНК использовали в 25 мкл полимеразной цепной реакции (Phusion High-Fidelity DNA Polymerase, New England Biolabs, США). Условия ПЦР были следующими: начальная денатурация при 98 ° C в течение 50 с; с последующими 35 циклами денатурации при 98 ° C в течение 30 с, отжига при 62 ° C в течение 30 с и удлинения при 72 ° C в течение 1 мин; с последующим заключительным этапом удлинения при 72 ° C в течение 7 мин.Амплифицированные продукты ДНК разделяли в 0,8% (мас. / Об.) Агарозном геле в 0,5 × TAE-буфере (20 мМ Трис, 10 мМ уксусная кислота, 0,6 мМ ЭДТА) при 50 В в течение 1 ч, окрашивали SafeView (BioPioneer, Тайвань). ) и визуализировали с помощью светодиодного трансиллюминатора (BV 200, Clinx Science Instruments, Китай). Полосы ДНК вырезали из гелей и секвенировали в каждом направлении компанией Genomics (Тайвань). Последовательности были подготовлены как мультифаст-файл, следуя инструкциям на веб-сайте анализа K. marxianus MLST ¹¹ .Филогенетическое дерево было создано с помощью онлайн-инструмента Interactive Tree Of Life (версия 6.0) в режиме свободного доступа (itol.embl.de) ³⁸ . Все праймеры, использованные для анализа в этом исследовании, перечислены в дополнительной таблице S5.

Кривые роста и определение концентрации белка

Рост штамма K. marxianus Bot3 + 7 определяли путем измерения OD ₆₀₀ и OD ₅₉₅ с помощью системы GeneQuant 1300 (GE Healthcare, Little Chalfont, Buckinghamshire , Великобритания) и считыватель микропланшетов Tecan Sunrise Basic (Tecan Austria GmbH, Грёдиг, Австрия) соответственно.В каждый момент времени в течение 5-дневного периода культивирования отбирали пробы 20 мкл дрожжевой культуры и помещали аликвоты в 96-луночный микропланшет в трех экземплярах и разбавляли 1:10 путем добавления 180 мкл дистиллированной воды для измерения роста. Кроме того, секрецию белка во внешнюю среду определяли путем измерения OD ₅₉₅ с помощью ридера для микропланшетов Tecan Sunrise Basic с использованием метода Брэдфорда с бычьим сывороточным альбумином в качестве стандарта, следуя инструкциям производителя (Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent, Bio -Рад, Геркулес, Калифорния, США).Для этого 50 мкл дрожжевой культуры в каждый момент времени центрифугировали при 14000 об / мин в течение 3 минут. После центрифугирования 40 мкл супернатанта отбирали в 96-луночный микропланшет в трех экземплярах и добавляли 160 мкл реагента Брэдфорда (1,25-кратного) для пятикратного разбавления белком.

Анализ с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

Культуральные среды образцов обрабатывали 10% трихлоруксусной кислотой и инкубировали на льду в течение 30 минут. Супернатанты собирали центрифугированием при 14000 об / мин при 4 ° C в течение 15 минут с последующим анализом ВЭЖХ.Концентрации молочной кислоты и глицерина определяли с помощью системы УВЭЖХ KNAUER PLATINblue (KNAUER, Берлин, Германия), оснащенной колонкой для ВЭЖХ Shodex Sh2011 (размер частиц 6 мкм, 300 мм × 8 мм, Showa Denko America, Нью-Йорк, Нью-Йорк, США). ) и детектор показателя преломления (RI) (AZURA RID 2.1L, KNAUER, Берлин, Германия). Подвижная фаза представляла собой 5 мМ H ₂ SO ₄ , и скорость потока составляла 0,6 мл / мин. Температура колонки составляла 60 ° C. Объем инъекции составлял 10 мкл для каждого анализа.

SDS-PAGE

Кристаллы собирали в центрифужные пробирки объемом 1,5 мл с наконечниками для пипеток и промывали ddH ₂ О. Затем кристаллы добавляли и растворяли в растворах реагента Брэдфорда до насыщения. Десять микролитров образца и предварительно окрашенного белкового маркера (PageRuler Plus Prestained Protein Ladder, от 10 до 250 кДа, Thermo Scientific) использовали для анализа SDS-PAGE.

Подготовка образца для анализа белков ЖХ-МС / МС

Белки в геле SDS-PAGE

Полосы белка сначала вырезали из геля в виде небольших кусочков.Затем добавляли 25 мМ бикарбонат аммония (ABC, Fluka) (растворенный в 50% ацетонитриле (ACN, J.T. Baker, Philipsburg, NJ, USA)). Смесь инкубировали 30 мин при комнатной температуре, и эту процедуру повторяли, если кусочки геля не обесцвечивались. Дегидратацию проводили добавлением 100% ACN. Восстановление и алкилирование проводили в следующие стадии: к кусочкам геля добавляли 10 мМ дитиотреитол (DTT, Sigma) (растворенный в 50 мМ ABC) с последующей инкубацией в течение 60 мин при 56 ° C. Растворы удаляли, добавляли 55 мМ йодацетамида (IAA, растворенный в 50 мМ ABC; Sigma) и кусочки геля инкубировали в течение 45 минут в темноте при комнатной температуре.Растворы удаляли, а кусочки геля обезвоживали 100% ACN. Трипсин (12,5 нг / мкл, растворенный в 50 мМ ABC; Trypsin Gold, Promega) добавляли к кусочкам геля, которые регидратировали при 4 ° C в течение 30–60 мин, а затем расщепляли в течение ночи при 37 ° C. Для выделения пептидов из геля сначала добавляли 30–100 мкл 5% муравьиной кислоты (FA, растворенную в 50% ACN; Fluka), кусочки геля перемешивали при комнатной температуре в течение 30–60 мин и переносили в новая центрифужная пробирка. Во-вторых, добавляли 15–50 мкл 5% ЖК, и пробирку инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин, затем добавляли 15–50 мкл 100% ACN и перемешивали в течение 30–60 мин.В-третьих, два раствора экстракта были объединены и высушены в Speed ​​Vac. Образцы были обессолены с помощью C18 ZipTips (Millipore) со следующими этапами: высушенные смеси пептидов обессоливали в 10 мкл ddH ₂ O, содержащего 0,1% FA, ZipTip активировали, промывая 3 раза 10 мкл 100% ACN. , наконечник 3 раза уравновешивали 10 мкл 0,1% FA, пептиды связывали с наконечником путем аспирации и дозирования растворов пептидов 10 раз, наконечник промывали 6 раз 10 мкл 0.1% FA, а пептиды элюировали 10 мкл 0,1% FA (растворенного в 50% ACN) путем аспирации и распределения 10 раз. Эти этапы повторяли для получения объединенного раствора, и объединенный раствор сушили с помощью вакуумного концентратора SpeedVac.

Белки в осадках клеток и среде для автолиза

Осадки клеток 120-часовых образцов собирали и промывали восемь раз 40 мл 50 мМ трис-HCl (pH 8,03) при 16 ° C. Промытые осадки растворяли в 1 мл 50 мМ Трис-HCl (pH 8.03) и добавляли примерно 300 мкл стеклянных шариков 0,5 мм. Смесь стеклянных шариков и гранул встряхивали в цикломиксере 30 раз при 2500 об / мин в течение 30 с каждое, погружая суспензию клеток в лед на 30 с между циклами встряхивания для получения по меньшей мере 3 мкг / мкл белка. Белки в супернатанте 120-часовых и 288-часовых культур K. marxianus концентрировали по крайней мере до 3 мкг / мкл с использованием мембран, отсекающих молекулярную массу 3k Amicon Ultra-15 (Millipore), в соответствии с инструкциями производителя.Образцы среды для автолиза также подвергали диализу 3,7 × 10 ^–15 раз 50 мМ трис-HCl (pH 8,03). Затем к 20 мкл образцов добавляли 1 мкл DTT (1 M) и 2,5 мкл 10% SDS, и после инкубации в течение 10 мин при 95 ° C образцы охлаждали до комнатной температуры. Добавляли три микролитра 1 М ИУК, и образцы реагировали в течение 30 мин в темноте при комнатной температуре. Добавляли двенадцать микролитров 40% акриламида, 4,5 мкл 10% SDS, 1,5 мкл 10% APS и 0,5 мкл TEMED, и образцы инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре с образованием геля для пробирки.Растворы отбрасывали и добавляли 500 мкл ddH ₂ O. Затем гель инкубировали 30 мин при комнатной температуре и разрезали на мелкие кусочки. Маленькие кусочки промыли три раза. Сначала использовали 100 мМ ABC в течение 15 мин. Затем использовали 50 мМ ABC и 50% ACN в течение 30 минут с последующей промывкой 100% ACN в течение 10 минут. После промывки образцы сушили с помощью вакуумного концентратора SpeedVac. Добавляли трипсин (0,5 мкг) и образцы расщепляли при 37 ° C в течение 16 часов. К пептидному экстракту добавляли ACN (100%), и он реагировал в течение 30 мин при комнатной температуре, а затем супернатант переносили в новую пробирку.Добавляли ACN (50%) и FA (1%), и образцы инкубировали в течение 60 минут при комнатной температуре. Затем супернатант переносили в новую пробирку. Затем добавляли 100% ACN и образцы инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем супернатант переносили в новую пробирку. Супернатант сушили с помощью вакуумного концентратора SpeedVac и ресуспендировали в 20 мкл 0,1% FA (в ddH ₂ O). Образцы были обессолены и сконцентрированы с использованием C18 ZipTip, как упоминалось ранее.Затем образцы ресуспендировали в 50 мкл 0,1% ЖК (в ddH ₂ O).

Анализ белков ЖХ-МС / МС

Анализ ЖХ-МС / МС выполняли на системе ВЭЖХ UltiMate 3000 RSLCnano (Thermo Fisher Scientific) в сочетании с масс-спектрометром TripleTOF 6600 (Applied Biosystems Sciex), оснащенным информационно-зависимым сбором ( IDA) и источник ионизации электрораспылением (ESI), работающий в положительном режиме.

Идентификация белков

Белки в геле SDS-PAGE были идентифицированы с использованием следующих методов.Условия жидкостной хроматографии были следующими: разделение элюированных пептидов выполняли на аналитической колонке Acclaim PepMap C18 (внутренний диаметр 75 мкм × 25 см nanoViper, размер частиц 2 мкм, размер пор 100 Å, Thermo Fisher Scientific). Подвижная фаза A содержала 0,1% FA в ddH ₂ O, а подвижная фаза B была 0,1% FA в 100% ACN. Градиент был следующим: 0–4,5 мин 95% A, 4,5–31 мин 95–65% A, 31–32 мин 65–10% A, 32–52 мин 10% A, 52–53 мин 10–95% A и 53–70 мин 95% A. Скорость потока составляла 300 нл / мин при 35 ° C, а объем загрузки образца составлял 10 мкл (0.1% FA). Образцы исследовали в трех экземплярах.

Условия масс-спектрометрии были следующими. Были использованы рабочие параметры режима ESI: напряжение ионного распыления + 2500 В, температура нагревателя интерфейса 150 ° C, потенциал декластеризации 80 В и температура термостата колонки 35 ° C. В качестве защитного газа и завесного газа использовался азот, а давление составляло 15 и 30 фунтов на квадратный дюйм соответственно. Был использован режим IDA. Диапазон сканирования TOF – MS был установлен на 350–1250 m / z с акклиматизацией в течение 0,25 с, а диапазон сканирования MS / MS был установлен на 65–1800 m / z с акклиматизацией для 0.1 с. Использовалось напряжение энергии столкновения качения. Первые 20 родительских ионов были отобраны после МС / МС. Для поиска в базе данных использовался Mascot (версия 2.3.02).

Протеомная идентификация (PRIDE)

Высвободившиеся белки идентифицировали описанными выше методами. В условиях ЖХ градиент был следующим: 0–4,5 мин 95% A, 4,5–95 мин 95–70% A, 95–101 мин 70–40% A, 101–106 мин 40–10% A, 106– 131 мин 10% A, 131–132 мин 10–95% A и 132–150 мин 95% A. Скорость потока составляла 300 нл / мин при 35 ° C, а объем загрузки образца составлял 10 мкл (0.1% FA).

Масс-спектрометрические условия были следующими. Были использованы рабочие параметры режима ESI: напряжение ионного распыления + 2800 В, температура нагревателя интерфейса 150 ° C, потенциал декластеризации 80 В, температура термостата колонки 35 ° C. В качестве защитного газа и завесного газа использовался азот, а давление составляло 15 и 30 фунтов на квадратный дюйм соответственно. Был использован режим IDA. Диапазон сканирования TOF – MS был установлен на 350–1250 m / z с акклиматизацией в течение 0,25 с, а диапазон сканирования MS / MS был установлен на 65–1800 m / z с акклиматизацией для 0.1 с. Использовалось напряжение энергии столкновения качения. Первые 20 родительских ионов были отобраны после МС / МС. Для поиска в базе данных использовался Mascot (версия 2.3.02).

Параметры поиска талисмана

Тип поиска и фермент были установлены как MS / MS Ion Search и трипсин, соответственно. Различные модификации включали карбамидометил (C), дезамидированный (NQ), окислительный (HW) и окислительный (M). Моноизотоп был использован в качестве параметра массы, а значения толерантности к массе для пептидов и фрагментов составляли ± 0.05 Да и ± 0,03 Да соответственно. Максимальное количество пропущенных расщеплений ферментом было установлено равным 2. База данных, использованная для поиска, представляла собой базу данных NCBI K. marxianus . Результаты представлены в виде дополнительного набора данных.

Количественная процедура полимеразной цепной реакции в реальном времени.

Экстракцию тотальной РНК проводили с использованием реагента TRIzol (Invitrogen). Клетки дрожжей собирали центрифугированием, а затем общую РНК экстрагировали в соответствии с инструкциями производителя.Выход РНК определяли с помощью микро-спектрофотометра Nano-100 (Medclub Scientific Co., Ltd., Тайвань). Всего 0,1 мкг РНК было преобразовано в кДНК с использованием системы обратной транскрипции GoScript ™, и анализ qPCR был выполнен с использованием LightCycler 480 SYBR Green Master Mix (Roche) на системе обнаружения ДНК в реальном времени Rotor-Gene 3000 (Corbett Research) . Уровни транскрипции рассчитывали для обработанных обратной транскриптазой и необработанных образцов и нормализовали к уровням актина ( ACT ).Изменения относительных уровней транскрипции рассчитывали как кратные изменения с использованием метода ΔΔCt. Все праймеры, использованные для анализа в этом исследовании, перечислены в дополнительной таблице S5.

Диета Грейси

Диета Грейси