B1 и b6 витамины: Анализ крови на витамины B1, B5, B6, В9, В12, С в Нижнем-Новгороде

Комбинация витамина B1 с витаминами B6 и/или B12 входит в группу A11DB

Анатомо-Терапевтически-Химическая (АТХ) система классификации (ATC)

Название: Комбинация витамина B₁ с витаминами B₆ и/или B₁₂

Латинское название: Vit B1 In Comb With Vitamin B6 And/Or Vitamin B12

Другие подгруппы по коду АТХ: A11D — Витамин B₁ и его комбинация с витаминами B₆ и B₁₂

	Бенфо-Бинавит		Таб., покр. оболочкой, 100 мг+100 мг: 30 или 60 шт. рег. №: ЛП-005760 от 28.08.19
	Бинавит		Р-р д/в/м введения: амп. 2 мл 5, 10 или 20 шт. рег. №: ЛП-000604 от 21.09.11 Дата перерегистрации: 12.07.18
	Бинавит форте		Таб., покр. пленочной оболочкой, 200 мг+100 мг+0.2 мг: 10, 20 или 60 шт. рег. №: ЛП-005518 от 14.05.19
	Битригам		Р-р д/в/м введения: 2 мл амп. 5 или 10 шт. рег. №: ЛП-006421 от 24.08.20
	Витагамма		Р-р д/в/м введения 2 мл: амп. 5 шт. рег. №: Р N003491/01 от 18.06.09
	Комбилипен®		Р-р д/в/м введения 100 мг+100 мг+1 мг+20 мг/2 мл: амп. 5 или 10 шт. рег. №: ЛС-001680 от 02.08.10 Дата перерегистрации: 06.07.17
	Комбилипен® Нейро табс		Таб., покр. пленочной оболочкой, 100 мг+100 мг: 15, 30, 45 или 60 шт. рег. №: ЛП-006782 от 15.02.21
	Комбилипен® НЕО		Р-р д/в/м введения 100 мг+100 мг+1 мг/2 мл: амп. 5 или 10 шт. рег. №: ЛП-005714 от 09.08.19
	Ларигама®		Р-р д/в/м введения: амп. 2 мл 5 или 10 шт. рег. №: ЛП-005170 от 08.11.18 Дата перерегистрации: 13.01.21
	Мильгамма®		Р-р д/в/м введения 100 мг+100 мг+1 мг+20 мг/2 мл: амп. 5, 10 или 25 шт. рег. №: П N012551/02 от 26.09.11 Дата перерегистрации: 29.06.20
	Мильгамма® Композитум		Таб., покр. оболочкой, 100 мг+100 мг: 15, 30 или 60 шт. рег. №: П N012551/01 от 30.12.11 Дата перерегистрации: 24.12.18
	Нейралгин® В		Р-р для в/м введения: 2 мл амп. 5, 10 или 25 шт. рег. №: ЛП-006457 от 14.09.20	Произведено: HBM PHARMA (Словакия)
	Нейробион®		Р-р д/в/м введения 100 мг+100 мг+1 мг/3 мл: амп. 3 или 10 шт. рег. №: ЛСР-004589/08 от 07.06.08 Дата перерегистрации: 20.03.19	Произведено: MERCK (Германия)
	Нейробион®		Таб. , покр. оболочкой, 100 мг+200 мг+200 мкг: 20 шт. рег. №: ЛС-001540 от 26.09.11 Дата перерегистрации: 07.08.15
	Нейрогамма		Р-р д/в/в и в/м введения 100 мг+50 мг/1 мл: амп. 5 шт. рег. №: ЛС-001325 от 02.08.11
	Сертогамма		Р-р д/в/м введения: амп. 2 мл 5 шт. рег. №: ЛП-005118 от 19.10.18
	Цитипигам® композитум		Таб., покр. пленочной оболочкой, 100 мг+100 мг: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 100, 120 или 200 шт. рег. №: ЛП-006606 от 30.11.20	Произведено: ОЗОН (Россия)
	Эллигамин®		Р-р д/в/м введения 100 мг+100 мг+1 мг+20 мг/2 мл: амп. 5, 10, 20, 25, 50, 250 или 500 шт. рег. №: ЛП-004966 от 01.08.18
	Юнигамма		Таб., покр. пленочной оболочкой, 100 мг+100 мг+2 мкг: 30 или 60 шт. рег. №: ЛСР-006140/10 от 30.06.10

Витамины B1, B2, B6, B12 (кратко) | Биология.

Реферат, доклад, сообщение, краткое содержание, лекция, шпаргалка, конспект, ГДЗ, тест

Тема:

Водорастворимые витамины

Витамин B₁ — один из важнейших в этой группе, играет большую роль в углеводном обмене. Недостаток или отсутствие этого витамина приводит к тяжёлым, иногда даже смертельным поражениям нервной системы, самая тяжёлая форма которых (болезнь бери-бери) — паралич ниж­них конечностей и мышечное истощение. Много витамина B₁ содержится в дрожжах, хлебном квасе, в зерновых и бобовых культурах, в яичном желтке, больше всего — в высевках пшеницы, ржи, риса.

Витамин B₂ принимает участие в обмене белков, жиров и углеводов, в про­цессах роста организма, возобновлении клеток кожи, слизистых оболочек. Он нужен для восприятия цвета и света. При его недостатке кожа становится су­хой, трескается, по краям губ образуются болезненные трещины, значительно ухудшается зрение. Основные источники этого витамина — яйца, сыр, молоко, ряженка, кефир, крупы, бобовые.

Витамин B₆ обеспечивает нормальное усвоение белков и жиров. Недостаток его в организме ребёнка вызывает задержку роста, малокровие, желудочно-ки­шечные расстройства, повышенную раздражительность. У взрослых нехватка витамина вызывает воспаление кожи, слизистых оболочек (чаще — ротовой полости), бессонницу. Этот витамин содержится во многих продуктах расти­тельного и животного происхождения: кукурузе, ячмене, горохе, картофеле, свёкле, говядине, яйцах, молоке. В норме витамин B₆ в достаточном количес­тве образуется микроорганизмами толстого кишечника. Материал с сайта http://worldofschool.ru

Витамин B₁₂ является противоанемическим фактором. При его недостатке в организме человека могут возникать тяжёлая, даже смертельная анемия. Ос­новной источник этого витамина — продукты животного происхождения: мя­со, печень. Причина возникновения авитаминоза — неполноценное питание, например вегетарианское.

На этой странице материал по темам:

• Доклад по биологии на тему витамины группы b

• B6 b12 доклад

• Витамины б-1,б-2,б-12

• Показатель наличия витамина b1,b6 в организме человека

• Помогите найти сообщение о витаминах b6,b12

Вопросы по этому материалу:

• Обоснуйте значе­ние витаминов группы B для организма человека.

• Назовите бо­лезненные состояния, которые возникают при недостатке витаминов группы B в организме.

Анализ на витамин В 1 (тиамин) в крови сдать в Москве

Метод определения ВЭЖХ-МС/МС (высокоэффективная жидкостная хроматография с тандемной масс-спектрометрией).

Исследуемый материал Плазма крови (ЭДТА)

Доступен выезд на дом

Онлайн-регистрация

Определение уровня витамина В1 можно проводить для оценки его статуса в организме. Однако данный тест недостаточно информативен для диагностики дефицита В1.

Синонимы: Тиамин-пирофосфат; Анеурин; старое название – Аневрин. B1; Vitamin F; Aneurin; Thiamine Diphosphate (TDP). 

Краткая характеристика определяемого вещества Витамин В1 

Витамин В1, или тиамин, – водорастворимый витамин, содержащийся в малом количестве в большинстве растительных и животных тканей, необходим для нормального функционирования мышц, сердца, нервной системы. Среди пищевых источников максимально богаты этим витамином цельные зерновые, постная свинина, субпродукты (печень, сердце, почки). Тиамин, входящий в состав пищевых продуктов, биологически неактивен. В печени под действием фермента тиаминкиназы он проходит ряд превращений в тиаминмонофосфат, тиаминдифосфат, тиаминтрифосфат. Биологически активная форма витамина B1 – тиамин пирофосфат (также известный как тиамин дифосфат) служит коферментом для реакций декарбоксилирования, катализируемых пируватным и кетоглутаратным комплексами, для фермента транскетолазы, комплекса дегидрогеназ альфа-кетокислот с разветвленной цепью и др. Витамин В1 необходим для энергетического метаболизма (митохондриального окислительного декарбоксилирования, пентозофосфатного пути и цикла Кребса), важен для поддержания ионных градиентов, механизмов проведения нервных импульсов, синтеза ацетилхолина и других процессов в нервной системе. 

Потребность в Витамине В1 и его источники 

Суточная потребность взрослого человека в витамине В1 составляет от 2 до 3 мг, что обеспечивает пищевой рацион. При тяжелой физической работе потребность в витамине В1 возрастает. Депонируется тиамин преимущественно в скелетных мышцах (до 50% всего запаса), в сердце, печени, почках, мозге. Продукты, богатые витамином В1: пшеница и рожь (зерно), бобовые (особенно соя), крупы. В злаках витамин содержится в зародыше и оболочке семян. В зернах ржи витамин распределен равномерно, поэтому ржаной хлеб является основным источником тиамина. В качестве источника витамина В1 выступает картофель, но с учетом рекомендованных норм его потребления. 

С чем может быть связан дефицит Витамина В1 в организме и как он проявляется 

Причиной дефицита В1 может быть недостаточное его поступление с пищей вследствие однообразной диеты, например, основанной на употреблении бедного тиамином шлифованного риса, а также сырой рыбы, которая содержит тиаминазы микробного происхождения, разрушающие витамин B1 в желудочно-кишечном тракте. Дефицит тиамина маловероятен у здоровых людей с доступом к различным продуктам питания, обеспечивающим адекватное потребление тиамина, однако, он нередко встречается и в развитых странах, что может быть связано с несбалансированным питанием, чрезмерным употреблением рафинированных углеводов, злоупотреблением алкоголем, анорексией, патологией пищеварительной системы. Алкоголизм вызывает недостаточность этого витамина в связи с нарушением всасывания, использования и сохранения нутриента в организме, что может приводить к развитию синдрома Корсакова-Вернике (алкогольная энцефалопатия). Тиамин разрушается при продолжительной термической обработке, особенно в щелочной среде, теряется при рафинировании зернопродуктов (мюсли, крупы быстрого приготовления и др.). Всасывание витамина В1 снижается при употреблении табака, алкоголя, кофе и продуктов питания, содержащих углекислые соли и соли лимонной кислоты. К группе риска развития недостаточности витамина В1 относятся пациенты на парентеральном питании без адекватных добавок тиамина, а также пациенты, находящиеся на длительном почечном диализе.

Коферментные производные тиамина активно участвуют в метаболизме углеводов, поэтому при избытке в рационе углеводов повышается потребность в тиамине, что может вызвать его относительную недостаточность. Дефицит тиамина может отмечаться у критически больных пациентов в связи с повышенной потребностью в тиамине. Введение глюкозы лицам группы риска по дефициту В1 (например, лицам с алкоголизмом) может усугублять у них его проявления. 

Дети особенно уязвимы к последствиям дефицита тиамина в первые месяцы жизни. Наибольшему риску подвержены дети, находящиеся на грудном вскармливании матерями, имеющими дефицит тиамина (чаще в развивающихся странах). В Израиле был описан детский авитаминоз, вызванный кормлением детской смесью с непредусмотренной нехваткой тиамина. 

Авитаминоз В1 приводит к нехватке АТФ, способствует накоплению недоокисленных метаболитов, оказывающих токсическое действие, и в первую очередь затрагивает наиболее аэробные ткани – мозг, нервы, сердце. Выраженный дефицит тиамина приводит к болезни бери-бери – тяжелой дисфункции нервной, сердечно-сосудистой и дыхательной систем. Выделяют «сухую» (без отеков) форму бери-бери, связанную преимущественно с неврологическими проявлениями: полиневритами, периферической нейропатией, мышечной слабостью или болью в верхних и нижних конечностях, нарушением походки, судорогами. «Влажная» форма бери-бери характеризуется сердечно-сосудистыми расстройствами с прогрессирующей сердечной недостаточностью и отеками. На более продвинутых стадиях дефицита возможны нейропсихиатрические проявления, которые соотносятся с синдромом Корсакова-Вернике. Проявления болезни бери-бери в грудном возрасте могут включать сердечную недостаточность (которая может возникнуть внезапно), судороги. Долгосрочные последствия дефицита витамина В1 проявляются задержками развития, в т. ч. развития речи, общей и мелкой моторики. 

С какой целью определяют уровень Витамина В1 в плазме крови 

Уровень витамина В1 в плазме отражает преимущественно уровень его недавнего поступления в организм и в меньшей мере – запасы. 

Специфика оценки статуса Витамина В1 в организме 

Для оценки статуса витамина В1 используют исследование его содержания в цельной крови, эритроцитах, плазме или сыворотке. Большая часть тиамина в циркулирующей крови находится в эритроцитах и лейкоцитах (до 90%). Тиамин плазмы составляет лишь 10% тиамина цельной крови, на его уровень в большей степени влияет недавнее потребление витамина и текущее состояние организма. Низкая концентрация В1 в плазме не всегда ассоциирована с клиническими проявлениями его нехватки – нет определенного порога, указывающего на развитие симптомов дефицита тиамина. В диагностике дефицита тиамина ведущую роль играет знание его клинических проявлений (нередко затрагивающих различные системы организма).

2244-PUB: Роль витаминов группы B (B1, B6, B12) в управлении диабетической периферической нейропатией (DPN): систематический обзор

Abstract

Введение: DPN влияет примерно на 50% диабетиков во всем мире ¹ . B Vits используются для лечения DPN, хотя доказательства, подтверждающие результаты лечения, различаются.

Цель: Оценить доказательства, подтверждающие использование B Vits в DPN.

Методы: поиск в литературе: медицинские предметные заголовки и текстовые слова в Pubmed / EMBASE выявили 226 клинических испытаний, опубликованных в период с 1978 по ноябрь 2018 года. Используя рекомендации PRISMA, данные были извлечены из подходящих исследований, а оценка риска систематической ошибки была оценена двумя авторами.

Основные результаты. Было отобрано 51 исследование с участием 4621 пациента [40 РКИ (плацебо-контролируемые: 7; активный контроль: 34) и 10 монопрофильных исследований]. Результаты плацебо-контрольных исследований, включающих ежедневную монотерапию витамином B [бенфотиамин 300-600 мг ИЛИ метилкобаламин 1500 мкг (MC)] ИЛИ супероксиддисмутазу (SOD), альфа-липоевую кислоту (ALA), ацетил L-карнитин (AC) и витамин B Комбинация ₁₂ показала значительное улучшение показателей / симптомов, связанных с нейропатией, по сравнению сконтроль. Одно исследование (150 мг пиридоксина в день) не показало улучшения нервной проводимости по сравнению с плацебо. Vit B ₆ 80 мг + 800 мг ALA / день не показали улучшения маркеров воспаления.

Когда моно- или комбинация витаминов B сравнивали с активными контролями [например: микронутриенты / травы (ALA; ALC; традиционная китайская медицина), лекарственные препараты (прегабалин; нортриптилин; венлафаксин) и изменения образа жизни (прижигание; низкожировые растительные препараты). диета)], 29 исследований показали улучшение симптомов ДПН по сравнению с контролем.Два исследования показали меньшую эффективность по сравнению с венлафаксином и цитидиновым трифосфатом. Все исследования витамина B в одной группе (внутримышечно MC 500 мкг 1 / день ИЛИ 3 раза в неделю ИЛИ бенфотиамин / Vit B ₁ / B ₁₂ ) показали улучшение функции нервов.

Заключение: витамин B имеет положительный эффект на нейрофизиологические симптомы и / или функции по сравнению с исходным уровнем в 38 исследованиях. РКИ, оценивающие эффективность витамина B в стандартизированной комбинации / дозах, ограничены. Для определения оптимальной комбинации / доз и продолжительности лечения необходимы дальнейшие исследования.

Раскрытие информации Дж. Лев: Нет. А. Барлоу: Нет. Л. Лим: Поддержка исследований; Себя; AstraZeneca. Спикерское бюро; Себя; Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc., Merck & Co. , Inc. K. Suastika: Нет. Ю. Ясахарда: Нет. С.Чан: Нет. A. Soh: Нет. Л.С. Ли: Нет. A.T. Загар: Нет.

• © 2019 Американской диабетической ассоциации.

Одновременное определение недериватизированных витаминов B1 и B6 в цельной крови с помощью обращенно-фазовой жидкостной хроматографии сверхвысокого качества Тандемная масс-спектрометрия

Аннотация

Фон

Витамин B1 (тиаминдифосфат) и B6 (пиридоксаль-5’фосфат) являются микроэлементами.Анализ этих микронутриентов важен для диагностики потенциального дефицита, который часто возникает у пожилых людей из-за недоедания, тяжелого алкоголизма и желудочно-кишечных расстройств из-за операции шунтирования или болезни. Существующие методы, основанные на высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), включают необходимость дериватизации и длительного времени анализа. Мы разработали тандемный масс-спектрометрический анализ с ультравысокой производительностью жидкостной хроматографии (UHPLC-MS / MS) с внутренними стандартами для одновременного измерения недериватизированного тиаминдифосфата и пиридоксаль-5’фосфата без использования реактива ионной пары.

Методы

Цельная кровь, депротеинизированная хлорной кислотой, содержащая меченные дейтерием внутренние стандарты тиаминдифосфат (тиазол-метил-D ₃ ) и пиридоксаль-5’фосфат (метил-D ₃ ), была проанализирована с помощью UHPLC-MS / MS. . Метод был проверен на неточность, линейность, восстановление и предел количественной оценки. Альтернативные (количественные) методы сравнения новых и используемых в настоящее время рутинных методов ВЭЖХ были установлены с помощью регрессии Деминга.

Результаты

Тиаминдифосфат и пиридоксаль-5’фосфат были измерены в течение 2,5 минут инструментального анализа. Пределы обнаружения составляли 2,8 нмоль / л и 7,8 нмоль / л для тиаминдифосфата и пиридоксаль-5’фосфата соответственно. Предел количественного определения составлял 9,4 нмоль / л для тиаминдифосфата и 25,9 нмоль / л для пиридоксаль-5’фосфата. Общая погрешность составляла 3,5–7,7% для тиаминдифосфата (44–157 нмоль / л) и 6,0–10,4% для пиридоксаль-5’фосфата (30–130 нмоль / л).Степень извлечения составляла 101–102% ± 2,5% (тиаминдифосфат) и 98–100% ± 5% (пиридоксаль-5’фосфат). Регрессия Деминга дала наклоны 0,926 и 0,990 для образцов пациентов (n = 282) и национальных образцов для проверки квалификации (n = 12) соответственно, пересечения +3,5 и +3 для тиаминдифосфата (n = 282 и n = 12) и наклонов 1,04 и 0,84, пересечения -2,9 и +20 для пиридоксаль-5’фосфата (n = 376 и n = 12).

Заключение

Описанный метод UHPLC-MS / MS позволяет одновременно определять недериватизированный тиамин-дифосфат и пиридоксаль-5’фосфат в цельной крови без интенсивной пробоподготовки.

Образец цитирования: Puts J, de Groot M, Haex M, Jakobs B (2015) Одновременное определение недериватизированных витаминов B1 и B6 в цельной крови с помощью тандемной масс-спектрометрии с обращенно-фазовой сверхвысокой жидкостной хроматографией. PLoS ONE 10 (7): e0132018. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132018

Редактор: Педро Таулер, Университет Балеарских островов, ИСПАНИЯ

Поступила: 6 февраля 2015 г .; Одобрена: 9 июня 2015 г .; Опубликован: 2 июля 2015 г.

Авторские права: © 2015 Puts et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника

Доступность данных: Все соответствующие данные доступны из DOI: 10.5061 / дриада.2sq12.

Финансирование: Авторы не получали специального финансирования на эту работу. Компания Agilent Technologies предоставила поддержку в виде заработной платы автору MH, но не сыграла никакой дополнительной роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Мартин Хэкс работает в компании Agilent Technologies. Нет никаких патентов, продуктов в разработке или продаваемых продуктов, которые можно декларировать. Это не влияет на соблюдение авторами всех политик PLOS ONE в отношении обмена данными и материалами, как подробно описано в руководстве для авторов.

Введение

Тиамин, первый идентифицированный витамин B, существует в виде нефосфорилированных и фосфорилированных производных тиамина; тиаминмонофосфат (TMP), тиаминдифосфат (TDP) и тиаминтрифосфат (TTP) [1].Основная биологически активная форма — TDP, который присутствует в эритроцитах. TDP играет важную роль в качестве кофермента в декарбоксилировании α-кетокислот и аминокислот с разветвленной цепью. Поэтому он необходим для выработки энергии (цикл Кребса). Кроме того, TDP действует как кофермент для транскетолазной реакции, которая опосредует превращение гексозы и пентозофосфатов [1]. Поскольку тиамин является водорастворимым витамином, а запасы в организме ограничены, дефицит возникает в течение 2–3 недель после прекращения приема [2]. Известно, что дефицит тиамина вызывает бери-бери и энцефалопатию Вернике, которая встречается у алкоголиков и пожилых людей. Более того, это было связано с микрососудистыми осложнениями у пациентов с сахарным диабетом [1,3–5]. Было высказано предположение, что тиамин играет роль в проводимости периферических нервов, хотя точные химические реакции, лежащие в основе этой функции, неизвестны.

Витамин B6 относится к семейству соединений, включая пиридоксин (PN), пиридоксаль (PL), пиридоксамин (PM) и их 5′-фосфатные производные.Пиридоксаль-5’фосфат (PLP) представляет собой активную форму витамина B6, который действует как кофактор для более чем 140 ферментов, участвующих в метаболизме аминокислот, гликогена, липидов, стероидов и некоторых витаминов, включая превращение триптофана в ниацин в виде а также участие в синтезе гема и нейромедиаторов [6, 7]. Дефицит PLP может возникать у пожилых людей из-за недоедания и желудочно-кишечного тракта из-за операции шунтирования и болезни. Кроме того, признана его важная роль в нормальном развитии и функционировании мозга. Выявлены специфические врожденные нарушения метаболизма, приводящие к функциональному дефициту B6 [8]. С другой стороны, прием больших доз B6 токсичен и приводит к полинейропатии [9,10]. Механизм этой нейротоксичности еще не выяснен.

Наиболее часто используемый метод анализа TDP и PLP — это анализ на основе ВЭЖХ для каждого витамина отдельно [11–25]. Действительно, используемые в настоящее время методы на основе ВЭЖХ в нашей лаборатории для измерения TDP и PLP состоят из двух отдельных методов ВЭЖХ.TDP анализируется при pH 10 с помощью обращенно-фазовой жидкостной хроматографии, выполняя стадию дериватизации перед колонкой с щелочным феррицианидом калия и детектированием флуоресценции, как описано van Landeghem et al [11]. PLP перед колонкой преобразуется в полукарбазон с последующим разделением колонки и детектированием флуоресценции при ph22 согласно Schrijver et al [12]. Эти методы требуют труда и времени, поэтому следует соблюдать меры предосторожности, поскольку цианид и семикарбазид, даже в небольших количествах, являются токсичными реагентами. Кроме того, анализ каждого витамина на основе ВЭЖХ выполняется примерно за 20 минут. Наша цель состояла в том, чтобы разработать для образцов пациентов метод УВЭЖХ-МС / МС с простой подготовкой образцов и без дериватизации для определения уровней TDP и PLP за один короткий цикл без использования реагента ионной пары, такого как гептафтормасляная кислота.

Материалы и методы

Заявление об этике

Оставшиеся образцы крови пациентов были анонимизированы и повторно использованы для валидации метода. Эта процедура была исключена из Закона о медицинских исследованиях с участием людей (ВМО) и одобрена Комитетом по медицинской этике, поскольку она не соответствовала критериям медицинских и научных исследований.Пациенты информируются через форму запроса лаборатории о возможности дальнейшего исследования, связанного с тестами, или контроля качества (QC) стандартных образцов пациентов. Пациентам предоставляется возможность заявить об отказе от сотрудничества для этой процедуры.

Материалы

Тиаминдифосфат (TDP) и пиридоксаль-5’фосфат (PLP) были приобретены у Sigma-Aldrich (Сент-Луис, США).

Меченные дейтерием внутренние стандарты TDP (тиазол-метил-D ₃ ) и PLP (метил-D ₃ ) были предоставлены Cambridge Isotope Laboratories Inc.(Тьюксбери, США).

Хлорная кислота (70%), хлористоводородная кислота и уксусная кислота аммония, для анализа были получены от Merck (Дармстад, Германия), карбонат аммония (> 30,0% NH ₃ оснований) от Sigma-Aldrich и метанол (100% градиент. ) от Merck.

Все реагенты были высокой степени чистоты, предназначенной для высокоэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии.

Вода была получена из системы обессоливания воды Ovivo, Mettler-Toledo B.V. (Цюрих, Швейцария).

оставшихся образцов крови (n = 12) были собраны у пациентов, которые были доставлены в больницу для лабораторных анализов TDP и PLP. Образцы крови были объединены и использованы в качестве матричного материала для калибровочной кривой. Начальные значения TDP и PLP составляли 78 нмоль / л и 55 нмоль / л, соответственно, как установлено стандартным методом добавления на UHPLC-MS / MS. В часть объединенного образца цельной крови добавляли TDP 75 и 150 нмоль / л и PLP 50 и 100 нмоль / л, делили аликвоты и хранили при -80 ° C до использования для экспериментов по извлечению.

Сбор и обработка проб

Образцы крови, собранные в пробирки для вакуумирования K ₂ -EDTA (Becton Dickinson), сразу же хранили при -20 ° C по прибытии в лабораторию. Перед анализом образцы готовили, как сообщалось ранее для TDP Ван Ландегхемом и др. [11], с небольшими изменениями: 2 мл холодной 5,25% хлорной кислоты (водной), содержащей внутренние стандарты TDP-D ₃ (114 нмоль / л ) и PLP-D ₃ (138 нмоль / л) добавляли к 0,5 мл гемолизированной крови плюс 50 мкл воды.Добавляли дистиллированную воду, чтобы уравнять объемы стандартов и образцов. Пробирки не нужно было хранить при температуре 4 ° C, и поскольку система ЖХ оснащена фильтром 0,2 мкМ, сразу после гнезда иглы автодозатора, что позволяет избежать блокирования колонки частицами, фильтрация образцов не требовалась. . После встряхивания образцы центрифугировали в течение 15 минут при 3500 g при 4 ° C и аликвоту (0,5 мл) переносили в светозащитные флаконы и помещали в лоток автоматического пробоотборника системы UHPLC-MS / MS.

Подготовка внутренних стандартов

TDP-D ₃ (3,9 мг) и PLP-D ₃ (1,4 мг) отдельно растворяли в 10 мл 0,01 М HCl.

Подготовка стандартов

Исходные стандарты, приготовленные в 0,01 М HCl, содержали 3,0 ммоль / л TDP и 0,5 ммоль / л PLP. Концентрацию TDP и PLP определяли взвешиванием сухих химикатов. Точную концентрацию TDP и PLP определяли спектрофотометрическими измерениями при 248 нм и 295 нм соответственно.Рабочие стандарты были приготовлены путем разбавления исходных стандартов до 1500 нмоль / л TDP и 1000 нмоль / л PLP 0,01 М HCl.

Калибровочная кривая была построена путем добавления PLP и TDP к 500 мкл цельной крови следующим образом: 50 мкл воды: 500 мкл цельной крови (стандарт 1), 25 мкл воды плюс 25 мкл рабочего стандарта: 500 мкл цельной крови (стандарт 2), Рабочий стандарт 50 мкл: цельная кровь 500 мкл (стандарт 3). Цельная кровь используется для калибровочной кривой, чтобы имитировать образцы пациентов.

Анализ УВЭЖХ

Используемая система УВЭЖХ представляла собой двоичный ЖХ 1290 Infinity, снабженный 0.Фильтр 2 мкМ, сразу после гнезда иглы системы автоматического пробоотборника (Agilent Technologies, Санта-Клара, США). Две колонки были испытаны на разделение TDP и PLP: I) 100×2,1 мм Hypercarb Porous Graphitic Carbon LC колонка с размером частиц 3 мкм (Thermo Fisher Scientific Inc., Уолтем, США), оснащенная вставной вставкой Hypercarb 10×2,1 мм. защитный картридж с размером частиц 3 мкм и 2) 50×2,1 мм Zorbax Eclipse Plus C18, размер частиц 1,8 мкм, оснащенный 5×2,1 мм Zorbax Eclipse plus C18, 1.Предварительная колонка с размером частиц 8 мкм (Agilent Technologies). Испытывали две подвижные фазы: 1) 50 ммоль / л уксусной кислоты аммония (pH 6,8) и 2) 98% воды + 4,8 г / л карбоната аммония (50 ммоль / л) и 2% метанола (pH 9,5). .

Две испытанные температуры колонки составляли 5 ° C и 10 ° C.

Оптимальный анализ разделения TDP и PLP был выполнен с помощью: Температура колонки и автоматического пробоотборника составляла 5 ° C и комнатная температура, соответственно. Анализ разделения проводился путем впрыскивания 10 мкл в 50×2.Колонка Zorbax Eclipse Plus C18 1 мм, размер частиц 1,8 мкм, оборудованная предварительной колонкой Zorbax Eclipse plus C18, размер частиц 1,8 мкм 5×2,1 мм (Agilent Technologies). Подвижная фаза состояла из 98% воды + 4,8 г / л карбоната аммония (50 ммоль / л) и 2% метанола (pH 9,5).

Представляющие интерес соединения элюировали изократически при скорости потока 0,4 мл / мин. Продолжительность аналитического цикла составила 2,5 мин.

Обнаружение МС

Обнаружение

MS выполнялось в системе 6460 MS (Agilent Technologies) с интерфейсом Jetstream.Чтобы предотвратить загрязнение источника ионов, МС был настроен на работу в течение первых 0,45 минут, чтобы вымыть полярные загрязнения.

Оптимизированные параметры для струйного источника ионизации и системы МС были установлены с использованием чистых внутренних стандартов TDP-D ₃ и PLP-D ₃ . Все ионы были проанализированы в положительном режиме.

Внутридневная и межсуточная точность анализа

Три пула цельной крови с низкой, средней и высокой концентрациями TDP (44, 104 и 157 нмоль / л) и PLP (30, 90, 130 нмоль / л) были разделены на аликвоты и хранили при –80 ° C.В одном аналитическом цикле различные пулы были проанализированы в четыре раза: два образца в начале и два образца в конце цикла. Межсуточная точность анализа была установлена ​​путем измерения пулов в течение 10 дней в течение 2 недель (n = 4 анализа за цикл * 10 дней = 40). Разница между днями ниже 15% (CV <15%) была установлена ​​для приемлемости теста в соответствии с Хонор и др. [26].

Линейность

Для установления линейности цельную кровь, собранную у пациентов с исходно низкими концентрациями TDP (112 нмоль / л) и PLP (39 нмоль / л), объединяли (= низкая концентрация в пуле). К этому низкому пулу добавляли 1075 нмоль / л TDP и 2825 нмоль / л PLP, чтобы создать пул с высокой концентрацией. Пул образцов с низким и высоким содержанием смешивали в различных соотношениях в соответствии с протоколом оценки протокола 6 Института клинических и лабораторных стандартов (протокол CLSI EP6) [27], чтобы создать образцы с 5 концентрациями и проанализировать с помощью УВЭЖХ-МС / МС. Различные пулы образцов также анализировали обычным методом ВЭЖХ.

Восстановление

Влияние матрицы было установлено следующим образом: 12 образцов пациентов были приготовлены в соответствии со стандартной процедурой, 12 образцов пациентов были разведены 1: 1 с h3O; В 12 проб пациентов добавляли TDP (75 и 150 нмоль / л) и PLP (50 и 100 нмоль / л).14 образцов пациентов были проанализированы с вдвое меньшим объемом инъекции. Процедура проводилась в соответствии с протоколом CLSI EP 7 [27].

Альтернативное (количественное) сравнение методов

Образцы пациентов (TDP: n = 142, диапазон концентраций 91–312 нмоль / л; PLP: n = 188, диапазон концентраций 29–573 нмоль / л) анализировали в двух экземплярах стандартным методом ВЭЖХ (TDP, тиохромный метод, согласно ван Ландегхему и др. [11], PLP, семикарбазидный метод, как описано Шрайвером и др. [13]) и в тот же день новым методом УВЭЖХ-МС / МС.Кроме того, с помощью обоих методов были проанализированы образцы нашей национальной программы проверки квалификации и коммерчески доступные контрольные уровни Chromsystems (Мюнхен, Германия), Recipe (Мюнхен, Германия) и Instruchemie (Делфзейл, Нидерланды).

Чувствительность количественного определения

Нижние пределы обнаружения и количественного определения (LOD, LOQ) были установлены с использованием программного обеспечения Agilent Tandem MS и внутренних стандартов. LOD и LOQ были рассчитаны путем анализа низкого стандарта 10 раз.LOD был определен как концентрация, при которой отношение сигнал / шум (S / N) составляло 3, а LOQ был определен как концентрация с отношением S / N, равным 10.

Статистический анализ

Данные и статистический анализ, то есть оценка точности анализа в течение дня / дня, сравнение EP6, EP7 и альтернативных (количественных) методов (регрессия Деминга) были выполнены с использованием программного обеспечения EP Evaluator, выпуск 7, Data Innovations LLC (Брюссель, Бельгия).

Результаты

Настройка масс-спектрометра

Путем вливания чистых растворов TDP, TDP-D ₃ , PLP и PLP-D ₃ (1 мг / 10 мл 0.01 M HCL) в источник ионизации Jetstream тандемного МС, были определены оптимальные уставки для источника ионизации Jetstream и системы МС (Таблица 1A). Все ионы были проанализированы в положительном режиме. Ионные переходы для TDP, TDP-D ₃ , PLP и PLP-D ₃ при ускоряющем напряжении 3 В показаны в таблице 1B. Ионы были подтверждены библиотекой масс-спектров NIST 2014, версия 2 (Agilent Technologies, Амстелвин, Нидерланды).

Хроматография

Несколько столбцов (100x 2.1 мм колонка Hypercarb Porous Graphitic Carbon LC с размером частиц 3 мкм, снабженная защитным картриджем Hypercarb 10×2,1 мм с размером частиц 3 мкм, колонка Zorbax Eclipse Plus C18 50×2,1 мм, размер частиц 1,8 мкм, оснащенная колонкой 5×2,1 мм Zorbax Eclipse plus C18, предварительная колонка с размером частиц 1,8 мкм), подвижные фазы (50 ммоль / л уксусной кислоты аммония (pH 6,8), 98% воды + 4,8 г / л карбоната аммония (50 ммоль / л) и 2% метанола ( pH 9,5)) и температуры колонок (5 ° C и 10 ° C) были выполнены для достижения разделения TDP и PLP за один аналитический цикл.Колонка Hypercarb показывала повышение давления на 10 бар после каждой новой закачки пробы, которое нельзя было снизить с помощью какой-либо очистки колонки. Еженедельно необходимо анализировать около 150 образцов TDP и PLP, а это означает, что повышение давления в колонке на 10 бар после каждой пробы не является надежным методом для использования в обычных условиях. Наилучшие результаты разделения TDP и PLP были достигнуты с использованием Zorbax Eclipse Plus C18 размером 50×2,1 мм, размер частиц 1,8 мкм, оснащенного Zorbax Eclipse plus C18,1 размером 5×2,1 мм.Предварительная колонка с размером частиц 8 мкм при температуре колонки 5 ° C. Оптимальная pKa для TDP и PLP оказалась около pH 9,5. Используя подвижную фазу карбоната аммония (50 ммоль) и метанола (2%) (pH 9,5) для изократического элюирования PLP и TDP, достигнутые времена удерживания составили соответственно 0,67 мин и 1,27 мин при общем времени анализа 2,5 мин (рис. 1). .

Рис. 1. Профили элюирования UHPLC-MS / MS TDP, PLP и внутренних стандартов цельной крови человека за общее время анализа 2,5 мин.

TDP — тиаминдифосфат, PLP — пиридоксаль-5’фосфат.Удельные массовые переходы ( m / z) показаны на рисунке.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132018.g001

Хотя эти условия (высокий pH,% органического растворителя и мМ буфер) находятся на грани рекомендованного компаниями состояния колонки, испытания показали, что колонка достаточно прочна для работы в этих условиях (> 2500 образцов при pH 9,5 без замены / замены колонки).

Минимальное обнаружение

LOD — 2.8 нмоль / л, а LOQ составляет 9,4 нмоль / л для TDP. LOD составляет 7,8 нмоль / л, а LOQ составляет 25,9 нмоль / л для PLP.

Точность / Неточность

Неточность метода, оцененная по низким, средним и высоким концентрациям TDP и PLP, показана в таблице 2. Внутри- и междневная точность составила 2,4–4,1% и 2,4–6,5% для TDP (44–157 нмоль / л). соответственно и 5,5–5,5% и 2,2–8,8% для PLP (30–130 нмоль / л) соответственно. Общая неточность варьировалась от 3,5–7,7% для TDP и 6,0–10,4% для PLP.

Линейность

Линейность, оцененная с 5 концентрациями TDP и PLP, показала, что оба компонента были линейными.TDP был линейным до 1153 нмоль / л с крутизной y = 0,985x + 6,9 (r = 0,999). PLP был линейным до 2864 нмоль / л с крутизной y = 1,013x-11,2 (r = 0,999).

Восстановление

Извлечение PLP и TDP в смеси вода: объединенная цельная кровь 1: 1 составило + 10% для PLP и + 20% для TDP. Вместо разбавления пробы предпочтительнее вводить меньший объем пробы, так как это показало извлечение 100% для PLP и 101% для TDP (таблица 3).

Сравнение методов

Методы сравнивались в течение месяца с использованием образцов пациентов (n = 188 для PLP и n = 142 для TDP).Концентрации образцов варьировали от 91 до 312 нмоль / л для TDP и от 29 до 573 нмоль / л для PLP, как установлено методами ВЭЖХ.

Регрессия Деминга для PLP дала y = 1,040x -2,9 (n = 376, в двух экземплярах), r = 0,974, среднее смещение 2,0 (1,6%), где x = метод семикарбазида PLP и y = метод UHPLC-MS / MS. Регрессия Деминга для TDP дала y = 0,926x + 3,5 (n = 282, в двух экземплярах), r = 0,910, среднее смещение -8,4 (-5,4%), где x = метод тиохромного TDP и y = метод UHPLC-MS / MS (рис. ).

Сравнение метода УВЭЖХ-МС / МС с образцами нашей национальной программы проверки квалификации (n = 12) с помощью регрессии Деминга дало наклон 0.990 с точкой пересечения 2,68, r = 0,998 и средним смещением 1,55 (1,3%) для TDP и наклоном 0,84 с точкой пересечения 20,49, r = 0,992 и средним смещением 7,13 (8,19%) для PLP (рис. 3) .

Устойчивость

Тиамин — один из наименее стабильных водорастворимых витаминов при нейтральном pH матрицы [7]. Максимальная стабильность достигается при pH от 2,0 до 4,0. Для оценки стабильности PLP и TDP было проанализировано всего 96 образцов после 24 часов и 48 часов хранения при комнатной температуре в автоматическом пробоотборнике в темноте.На рис. 4 показано, что концентрация PLP и TDP может быть адекватно измерена в течение 48 часов при корректировке внутренним стандартом.

Рис. 4. Стабильность PLP и TDP, оцененная в обработанных образцах крови (A) и их внутренних стандартах (B), которые хранили в течение 24 и 48 часов при комнатной температуре в темноте.

A: в обработанных образцах крови. Коробка представляет процентили 25 и 75 (P25 и P75). Длина прямоугольника представляет собой межквартильный диапазон концентрации и содержит 50 процентов случаев.Линии, выходящие из ящика, выходят на самые маленькие и самые большие концентрации. B: внутренние стандарты TDP и PLP.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132018.g004

Обсуждение

Чтобы учесть большое количество анализов на витамин B1 и витамин B6 в нашей лаборатории, существует острая потребность в новом методе с короткой хроматографией и временным изменением. Мы разработали точный, быстрый и чувствительный метод УВЭЖХ-МС / МС для одновременного количественного определения TDP и PLP в цельной крови человека.Комбинированный анализ TDP и PLP в цельной крови с помощью UHPLC-MS / MS ранее не описывался. В нашем методе использовалась цельная кровь, а не промытые эритроциты, чтобы сократить время, затрачиваемое на предварительный анализ. Он не требовал дериватизации, и мы использовали простую подвижную фазу без реагента ионного спаривания HFBA. Следует избегать использования реактива ионной пары из-за загрязнения масс-детектора. Мы показываем, что TDP и PLP теперь могут быть определены количественно за один прогон, что дает более высокую пропускную способность по сравнению с ВЭЖХ.

Недостатком современных методов ВЭЖХ для измерения TDP и PLP является необходимость дериватизации до или после колонки. Подготовка проб может привести к человеческим ошибкам, которые не замечаются из-за отсутствия надлежащих внутренних стандартов в методах ВЭЖХ. Кроме того, подготовка образцов требует много времени [11–25].

Поскольку ЖХ-МС / МС — отличный метод для количественной оценки различных компонентов в одном и том же цикле без необходимости дериватизации и подготовки образцов, нашей целью было разработать метод на основе УВЭЖХ-МС / МС для определения статуса витаминов B1 и B6 в пациенты.В литературе описано несколько методов LC-MS / MS для измерения PLP [28], витаминов B6 в плазме [29–30], жидкости [31] или водорастворимых витаминов в выбранных пищевых матрицах [32].

Midttun и др. [29] разработали метод LC-MS / MS для анализа витаминов B2 и B6 не только в активной форме, но и в неактивных формах в плазме крови человека. Gentili et al [32] показали, что водорастворимые витамины группы B, включая B1 (тиамин) и B6 (5 витамеров), могут быть одновременно оценены в пищевых матрицах путем обнаружения с помощью матрицы фотодиодов в последовательности с тройной квадратичной MS-множественной реакцией. Мониторинг.

Являются ли все витамины B6 или только PLP плазмы лучшим предиктором статуса B6, еще не выяснено [33]. Bates [34] и Leklem [35] предположили, что PLP в плазме достаточно для клинической практики. В плазме витамин B6 присутствует только в виде PLP и PL [29], из которых PLP является каталитически активной формой витамина B6 [8]. TDP является основной формой, присутствующей в цельной крови, и отражает концентрацию в эритроцитах [12]. Поэтому мы использовали цельную кровь для оценки статуса витаминов B1 (TDP) и B6 (PLP).Измерение неактивных витаминов B желательно только при редкой недостаточности метаболических ферментов. Следовательно, только активные формы витамина B1 и витамина B6, то есть TDP и PLP, представляют интерес для определения статуса питания пациентов.

В новом разработанном методе мы выбрали внутренние стандарты (PLP-D ₃ и TDP-D ₃ ) с поведением, аналогичным целевым аналитам (PLP и TDP) при подготовке, введении и анализе образцов в UHPLC-MS / MS для корректировки аналитической вариации.Кроме того, использование внутренних стандартов регулирует подавление ионов, если они присутствуют в той же матрице, что и анализируемые целевые аналиты (PLP и TPD). Внутренние стандарты (PLP-D ₃ и TDP-D ₃ ) стабильны при хранении в течение нескольких месяцев, что является преимуществом. Напротив, в нашем текущем методе ВЭЖХ с семикарбазидом и тиохромом отсутствует внутренний стандарт, потому что отсутствуют соответствующие внутренние стандарты. Для анализа тиамина для коррекции объема инъекции использовались салициламид, салицилат натрия и антрацен, поскольку эти соединения флуоресцируют аналогично тиохрому [36].Для анализа PLP был добавлен 4-дезоксипиридин, но количество, необходимое для обеспечения достаточной флуоресцентной реакции, может препятствовать элюированию метаболитов в низких уровнях в некоторых системах [37].

Мы выполнили простую преципитацию белка только в образце. Хотя осаждение белков не удаляет липиды, этого было достаточно для обеспечения хорошего качества образца. Более того, планшеты для удаления липидов основаны на использовании метанола в более высоких концентрациях (3: 1 МеОН), чем концентрация в нашем методе UHPLC-MS / MS (2%), что неудобно.

Неточность нового метода была в установленных пределах, т.е. <7,7% для TDP и <10,4% для PLP, и была лучше по сравнению с методом ВЭЖХ для TDP [11] и PLP [38]. Этот метод является линейным, намного превышающим физиологически значимые концентрации: до 1153 нмоль / л для TDP и до 2864 нмоль / л для PLP. Образцы пациентов, проанализированные методом ВЭЖХ с тиохромом и семикарбазидом и методом УВЭЖХ-МС / МС, показали сопоставимые результаты. Образцы нашей национальной программы проверки квалификации для TDP также показали идентичные результаты для UHPLC-MS / MS и метода консенсуса (HPLC).Согласие между методами было не таким хорошим для PLP в образцах нашей национальной программы проверки квалификации, что было связано с двумя образцами с очень низкими концентрациями. Эти образцы показали гораздо более высокую концентрацию, оцененную с помощью анализа UHPLC-MS / MS.

Исключая эти образцы, мы обнаружили наклон 0,89 с точкой пересечения 8,00 для PLP. Тщательное исследование двух образцов нашей национальной программы проверки квалификации с самыми низкими концентрациями выявило гораздо более высокие области внутреннего стандарта по сравнению с областями в образцах крови и других образцах нашей национальной программы проверки квалификации.Это говорит о том, что матрица в двух образцах нашей национальной программы проверки квалификации с низкими концентрациями PLP была разной. Выполняя стандартную кривую добавления PLP, мы обнаружили наклон 1,06 и точку пересечения -2,00 (рис. 3). Следовательно, образцы, отличные от крови (с другой матрицей), не подходят для нашего метода, но все же могут быть измерены стандартным добавлением. Мы наблюдали то же явление в коммерчески доступных контрольных образцах (данные не показаны). Качество контрольных образцов не влияет на точность, если эти образцы не сопоставимы с образцами матрикса крови [39].

Интерференция не исследовалась, поскольку витамины (B2, B3 и B5) и обычные лекарства, такие как кофеин, ацетаминофен, аспирин, дифенгидрамин, эфедрин, ибупрофен или напроксен, имеют разные m / z .

В заключение, мы разработали высокочувствительный и специфический метод УВЭЖХ-МС / МС, пригодный для одновременного анализа TDP и PLP в цельной крови человека.

В новом методе УВЭЖХ-МС / МС мы использовали простую пробоподготовку, без дериватизации TDP и PLP и добавили внутренние стандарты для корректировки обработки проб.Метод легко реализуется в рутинных диагностических установках. LOQ TDP и PLP составляли 9,4 нмоль / л и 25,9 нмоль / л соответственно. CV TDP были <7,7%, а PLP <10,4%. Этот метод, время работы которого составляет 2,5 мин, является отличной альтернативой применяемым в настоящее время методам ВЭЖХ. Настоящее исследование показало сопоставимые результаты между УВЭЖХ-МС / МС и ВЭЖХ в образцах пациентов, но выявило некоторые различия в производительности образцов нашей национальной программы проверки квалификации и коммерчески доступных контрольных уровней.Необходимо учитывать различия матриц, которые могут привести к неточным результатам.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: JP MG MH BJ. Проведенные эксперименты: JP. Проанализированы данные: JP MG MH BJ. Написал статью: JP BJ. Прочитал и исправил статью и добавил предложения: JP MG MH BJ.

Ссылки

1. 1. Шенкин А., Бейнс М., Фелл Г.С., Лион ТД. Витамины и микроэлементы. В: Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE, редакторы.Учебник Тиц по клинической химии и молекулярной диагностике. 4-е изд. Сент-Луис: Эльзевьер Сондерс; 2006: 1075–164.
2. 2. Повар CC, Hallwood PM, Thomson AD. Дефицит витамина B и психоневрологические синдромы при злоупотреблении алкоголем. Алкоголь и алкоголизм 1998; 33: 317–36. pmid: 9719389
3. 3. Томсон А.Д., Джеузингем М., Пратт О.Е. Питание и алкогольные энцефалопатии. Acta Medica Scan 1987; 717 (Дополнение): 55–65.
4. 4. Аль-Атас О.С., Аль-Дагри Н.М., Альфадда А.А., Абд-Альрахман С.Х., Сабико С.Тиамин и его фосфатные эфиры в крови, измеренные с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии: уровни и ассоциации у пациентов с сахарным диабетом с различной степенью микроальбуминурии. J Endocrinol Invest 2012; 35 (11): 951–6. pmid: 22107884
5. 5. Thornalley PJ. Потенциальная роль тиамина (витамина B1) в диабетических осложнениях. Curr Diabetes Rev 2005; 1 (3): 287–98. pmid: 18220605
6. 6. База данных KEGG PATWAY по адресу http://www.genome.jp/kegg/pathway.html
7. 7.Eitenmiller RR, Ye L, Landen WO Jr, In: Анализ витаминов для науки о здоровье и продуктах питания. 2-е изд. CRC press Группа Тейлор и Фрэнсис; 2008; Глава девятая.
8. 8. Clayton PT. B6-ответные расстройства: модель витаминной зависимости. Журнал Наследие Metab Dis 2006; 29 (2–3): 317–326. pmid: 16763894
9. 9. Berger AR, Schaumburg HH, Schroeder C, Apfel S, Reynolds R. Дозовая реакция, приближение и дифференциальная уязвимость волокон при токсической нейропатии человека: проспективное исследование нейротоксичности пиридоксина.Neurol 1992; 42: 1367–1370
10. 10. Hartmann H, Fingerhut M, Jakobs C, Plecko B. Эпилептический статус у новорожденного, получавшего пиридоксин, из-за риска семейного рецидива дефицита антиквитина: токсичность пиридоксина? Dev Med Child Neurol 2011; 53 (12): 1150–1153. pmid: 21707605
11. 11. Ван Ландегем БАЖ, Путс Дж., Клаессенс Х.А. Анализ тиамина и его производных в образцах цельной крови в условиях высокого pH подвижной фазы. J Chromatogr B 2005; 822: 316–21.
12. 12. Лу Дж., Фрэнк Э.Л. Быстрое измерение тиамина и его фосфатных эфиров в цельной крови с помощью ВЭЖХ. Clin Chem 2008; 54: 901–8. pmid: 18356241
13. 13. Schrijver J, Speek AJ, Schreurs WHP. Полуавтоматическое флуорометрическое определение пиридоксаль-5’фосфата (витамина B6) в цельной крови с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Internat J Vit Nutr Res 1981; 51: 216–22.
14. 14. Коберн С.П., Махурен Дж.Д. Универсальный катионообменный метод измерения семи основных форм витамина B6 в биологических образцах.Анальная биохимия, 1983; 129: 310–7. pmid: 6846830
15. 15. Сэмпсон Д.А., О’Коннор Д.К. Анализ витаминов B6 и пиридоксической кислоты в плазме, тканях и моче с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. Nutr Res 1989; 9: 259–72.
16. 16. Эдвардс П., Лю ПКС, Роуз А.А. Простой жидкостный хроматографический метод измерения соединений витамина B6 в плазме. Clin Chem 1989; 35: 241–5. pmid: 2914368
17. 17. Куреши С., Хуанг Х. Определение витамеров B6 в сыворотке с помощью простой изократической высокоэффективной жидкостной хроматографии.Жидкостная хроматография 1990; 13: 191–201.
18. 18. Шарма С.К., Дакшинамурти К. Определение витамеров витамина B6 и пиридоксической кислоты в биологических образцах. J Chromatogr 1992; 578: 45–51. pmid: 1400785
19. 19. Reynolds TM, Brain A. Простой внутренне стандартизированный изократический анализ ВЭЖХ на содержание витамина B6 в сыворотке крови человека. Жидкостная хроматография, 1992; 15: 897–914.
20. 20. Kimura M, Kanehira K, Yokoi K. Высокочувствительное и простое жидкостное хроматографическое определение в плазме витаминов B6, особенно пиридоксаль-5’-фосфата.J Chromatogr A 1996; 722: 295–301. pmid: ₀₂
21. 21. Bates CJ, Pentieva KD, Matthews N, Macdonald A. Простой, чувствительный и воспроизводимый анализ пиридоксаль-5’-фосфата и 4-пиридоксической кислоты в плазме крови человека. Clin Chim Acta 1999; 280: 101–11. pmid: 100
22. 22. Deitrick CL, Katholi RE, Huddleston DJ, Hardiek K, Burrus L. Клиническая адаптация метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для анализа пиридоксаль-5’-фосфата в плазме человека. J Chromatogr B Biomed Sci Appl 2001; 751: 383–7.pmid: 11236096
23. 23. Bisp MR, Vakur Bor M, Heinsvig EM, Kall MA, Nexo E. Определение витаминов B6 и пиридоксической кислоты в плазме: разработка и оценка высокоэффективного жидкостного хроматографического анализа. Анальная Биохимия 2002; 305: 82–9. pmid: 12018948
24. 24. Талвар Д., Квазим Т., Макмиллан, округ Колумбия, Кинселла Дж., Уильямсон К., О’Рейли Д.С. Оптимизация и валидация чувствительного анализа высокоэффективной жидкостной хроматографии для рутинного измерения пиридоксаль-5-фосфата в плазме и эритроцитах человека с использованием дериватизации семикарбазида перед колонкой.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2003; 792: 333–43. pmid: 12860041
25. 25. Рыбак М.Е., Пфайфер СМ. Клинический анализ витамина B (6): определение пиридоксаль-5’-фосфата и 4-пиридоксической кислоты в сыворотке крови человека с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с постколоночной дериватизацией хлорита. Анальная биохимия 2004; 333: 336–44. pmid: 15450810
26. 26. Честь JW. Разработка и проверка количественного анализа на основе тандемной масс-спектрометрии.Энн Клин Биохим 2011; 48: 97–111. pmid: 21303874
27. 27. Институт клинических и лабораторных стандартов http://shop.clsi.org/method-evaluation-documents/
28. 28. Van Zelst BD, De Jonge R. Метод LC-ESI-MS / MS с разведением стабильных изотопов для количественного определения пиридоксаль-5’-фосфата в цельной крови. J Chromatogr B 2012; 903: 134–141.
29. 29. Midttun Ø, Hustad S, Solheim E, Schneede J, Ueland PM. Мультианалитическое количественное определение видов витаминов B6 и B2 в наномолярном диапазоне в плазме человека с помощью жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии.Clin Chem 2005; 51: 1206–1216. pmid: 15976101
30. 30. Footitt EJ, Clayton PT, Mills K, Heales SJ, Neergheen V, Oppenheim M и др. Измерение профиля витамина B ₆ в плазме у детей с врожденными ошибками метаболизма витамина B ₆ с использованием метода ЖХ-МС / МС. Журнал Наследие Metab Dis 2012; 36: 139–45. pmid: 22576361
31. 31. Ван дер Хам М., Альберсен М., де Конинг Т. Дж., Виссер Дж., Миддендорп А., Босма М. и др. Количественное определение витамеров витамина B6 в спинномозговой жидкости человека с помощью сверхэффективной жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии.Анальный Чим Acta 2012; 712: 108–14. pmid: 22177072
32. 32. Джентили А. Каретти Ф., Д’Асенцо Дж., Марчезе С., Перре Д., Ди Корча Д. и др. Одновременное определение водорастворимых витаминов в выбранных пищевых матрицах с помощью тандемной масс-спектрометрии жидкостной хроматографии / ионизации с электрораспылением. Rapid Commun Mass Spectrom 2008; 22: 2029–43. pmid: 18512845
33. 33. Bates CJ, Pentieva KD, Prentice A, Mansoor MA, Finch S. Пиридоксальфосфат и пиридоксическая кислота в плазме и их связь с гомоцистеином плазмы в репрезентативной выборке британских мужчин и женщин в возрасте 65 лет и старше.Br J Nutr 1999; 81: 191–201. pmid: 10434845
34. 34. Бейтс CJ. Анализ витаминов. Энн Клин Биохим 1997; 34: 599–626. pmid: 9366998
35. 35. Leklem JE. Витамин B6. В: Морис Э., Олсон Дж. А., Шайк М., ред. Современное питание в здоровье и болезнях, 8-е изд. Филадельфия: Леа и Фебигер 1994; 383–94.
36. 36. Кавасакэ Т., Эги Ю. Тиамин. В: De Leenheer AP, Lambert WE, Van Bocxlaer JF, ред. Современный хроматографический анализ витаминов, 3-е изд. Марсель Деккер Инк., New York 2000; глава 8.
37. 37. Грегори Дж. Ф. Методы определения B-6 в пищевых продуктах и ​​других биологических материалах: критический обзор. J Food Compos Anal 1988; 1: 105.
38. 38. Рыбак М.Э., Джайн Р.Б., Пфайфер СМ. Клинический анализ витамина B6: межлабораторное сравнение измерений пиридоксаль-5’-фосфата в сыворотке. Clin Chem 2005; 51: 1223–31. pmid: 15
    1
39. 39. Hoad KE, Johnson LA, Woollard GA, Walmsley TA, Briscoe S, Jolly LM и др.Гармонизация методов получения витаминов B1 и B6: сравнение эффективности лабораторий, участвующих в программе обеспечения качества RCPA. Clin Biochem 2013; 46 (9): 772–6. pmid: 23388676

Витамины B1, B2, B6 в цельной крови ⎜ РЕЦЕПТ

Анализируемыми витаминами являются тиаминпирофосфат TPP (витамин B1; синоним: тиаминдифосфат TDP), флавинадениндинуклеотид FAD (витамин B2), пиридоксаль PL и пиридоксаль-5´ фосфат PLP и (оба витамина B6).Определение витаминов группы B (B1, B2 и B6) проводится при подозрении на невропатию. Дефицит также может возникать при диабете 1 и 2 типа. Целесообразно также определять витамины группы B при поиске причины недостаточной концентрации при подозрении на недостаточность питания.

Подготовка проб

Хроматография

Информация для заказа

Номер для заказа	Описание	Количество
MS13000	Полный набор ClinMass® для витаминов B1, B2, B6 в цельной крови для 400 анализов	1 шт.
Компоненты комплекта (номер для заказа MS13000):
MS13005	Промывочный раствор автосамплера	1000 мл
MS13008	Подвижная фаза A	1000 мл
MS13009	Подвижная фаза B	300 мл
MS13012	Внутренний стандарт IS, лиофильный.	3 мл
MS13013	Набор калибратора цельной крови, лиофильный. (Уровень 0 — 3)	4 x 1 x 1 мл
MS13020	Пробирки для пробоподготовки	100 шт.
MS13021	Осадитель P	25 мл
	Руководство	1 шт.
Дополнительные компоненты:
MS13014	Оптимизационная смесь, лиофильная.	2 мл
Принадлежности для запуска:
MS13030	Аналитическая колонка с тестовой хроматограммой	1 шт.
Элементы управления ClinChek®:
MS13082	Контроль цельной крови, лиофил., Уровень I, II	2 x 5 x 1 мл

Дефицит витамина B — обзор

Дефицит витамина B

Гипергомоцистеинемия также вызвана дефицитом витамина B. Дефицит фолиевой кислоты и витамина B ₁₂ приводит к нарушению реметилирования гомоцистеина, вызывая легкое, умеренное или сильное повышение уровня гомоцистеина в плазме, в зависимости от тяжести дефицита, а также сосуществование генетических или других факторов, влияющих на метаболизм гомоцистеина ( см. ниже).Поскольку рибофлавин необходим для синтеза флавинадениндинуклеотида (FAD) и поскольку FAD служит кофактором MTHFR, дефицит рибофлавина также может влиять на реметилирование гомоцистеина и, таким образом, способствовать повышению уровня гомоцистеина в плазме. Дефицит витамина B ₆ ведет к нарушению катаболизма гомоцистеина и, таким образом, также вызывает гипергомоцистеинемию. Однако природа гипергомоцистеинемии, вызванной дефицитом витамина B ₆ , отличается от природы, вызванной дефицитом фолиевой кислоты и витамина B ₁₂ : при дефиците витамина B ₆ уровни гомоцистеина в крови натощак обычно не повышаются или повышаются лишь незначительно.Только после белковой пищи или после приема перорального приема метионина (см. Ниже) у пациентов с дефицитом витамина B ₆ повышается уровень гомоцистеина в плазме крови. Напротив, уровни гомоцистеина в плазме имеют тенденцию повышаться независимо от состояния приема пищи у пациентов с дефицитом фолиевой кислоты или витамина B ₁₂ . Причина этих различных проявлений, вероятно, связана с различными эффектами дефицита витаминов на внутриклеточные уровни SAM и, как следствие, нарушением аллостерического контроля метаболизма гомоцистеина.

В последнее время растет интерес к концепции пищевой геномики. Это относится к генетической изменчивости среди людей и ее влиянию на потребности в питании. Ярким примером этой концепции является общий полиморфизм в MTHFR (677C → T), в котором аланин заменен на валин в кодоне 222 в первичной последовательности фермента. Лица с гомозиготным вариантом (677TT) этого гена (10–15% от общей популяции; ниже у чернокожих, выше у латиноамериканцев и в некоторых частях Европы, т.е.g., Южная Италия) имеют термолабильный фермент с пониженным сродством к его субстрату (метилентетрагидрофолату) и его кофактору (FAD). Следовательно, людям с 677TT требуется более высокое потребление фолиевой кислоты и рибофлавина для поддержания оптимальной активности фермента, чем людям с изоформой фермента дикого типа (677CC). Это отражается в том факте, что уровни гомоцистеина в крови выше у людей с изоформой 677TT, чем у людей с изоформой 677CC, но только тогда, когда общий статус фолиевой кислоты и / или рибофлавина низкий.Когда общий статус фолиевой кислоты и рибофлавина высокий, не наблюдается разницы в уровнях гомоцистеина между изоформами.

Важность полиморфизма MTHFR для клинической практики и общественного здравоохранения заключается в том, что женщины с изоформой 677TT имеют повышенный риск рождения ребенка с дефектом нервной трубки (например, spina bifida, sp . Anencephaly). Этот риск можно снизить с помощью добавок фолиевой кислоты — наблюдение, которое лежит в основе решения правительства США об обязательном обогащении фолиевой кислотой зерновых продуктов с января 1998 года.Эта программа оказалась весьма успешной, поскольку позволила снизить распространенность дефицита фолиевой кислоты с более чем 20% до примерно 1%, распространенность гипергомоцистеинемии примерно на 50% и частоту дефектов нервной трубки по крайней мере на 20%. Успех программы обогащения фолиевой кислоты в США породил аналогичные программы в нескольких странах Северной и Южной Америки, включая Канаду, Чили и Коста-Рику. Обогащение фолиевой кислотой также было начато в Венгрии и Израиле, но другие европейские страны, в первую очередь Великобритания, не спешили применять эту стратегию вмешательства.Это связано с опасениями по поводу осуществимости обогащения, нерешительностью относительно введения обязательного обогащения для населения, сохраняющейся озабоченностью по поводу маскировки дефицита B ₁₂ и возможностью других нераспознанных последствий для здоровья, связанных с избыточным потреблением фолиевой кислоты.

Были идентифицированы другие полиморфизмы в MTHFR и других ферментах, участвующих в метаболизме гомоцистеина (например, метионинсинтаза, метионинсинтаза редуктаза (EC 1.16.1.8), цистатионин-β-синтаза), и их общее влияние на метаболизм гомоцистеина, потребность в витамине B и риск заболевания оценивался и продолжает оцениваться.

Как несколько простых изменений образа жизни могут облегчить вашу нервную боль: Дэвид Беркауэр, DO: Физическая медицина и реабилитация

Говоря прямо, нервная боль может ослабить вас, если вы не получите лечения. Любое количество факторов может вызвать вашу боль, в том числе:

• Диабет, инсульт, рассеянный склероз, рак или другое серьезное заболевание
• Травма головного или спинного мозга
• Плохое кровоснабжение нервов
• Синдром запястного канала или ишиас
• Опухоли, которые давят на нервы и вызывают боль

Если вы страдаете нервной болью или невропатией, докторДэвид Беркауэр из Berkower Pain & Spine Rehabilitation в Пембрук-Пайнс, Флорида, может помочь.

Лучшая диета для нервов

витаминов группы В защищают нервные клетки. Витамин B1 (тиамин) дает вашим нервам энергию для функционирования, а витамин B6 снимает нервную боль и правильно передает нервные импульсы. Витамин B12 регенерирует нервы, защищая их от повреждений.

Дефицит витаминов B12 или B1 может частично быть причиной нервной боли. Доктор Беркауэр может помочь вам спланировать здоровую нервную диету, которая включает свежие фрукты и овощи, нежирные белки и цельнозерновые продукты, чтобы компенсировать любой дефицит витаминов и позволить вашему организму восстановиться.

Дополнительные диетические изменения

• Удалите глютен или, по крайней мере, сосредоточьтесь на более здоровых зерновых без глютена, таких как киноа, амарант, теф и сорго.
• Примите участие в веганской диете. Уменьшение или исключение мяса, сыра и молока должно помочь сбалансировать уровень сахара в крови, что может успокоить нервную боль.
• Пейте много воды, чтобы питательные вещества циркулировали.
• Умерьте потребление сахара и полностью откажитесь от искусственных подсластителей.
• Удовлетворите сладкоежек фруктами с низким гликемическим индексом, такими как яблоки, абрикосы, груши, апельсины, клубника, виноград и сливы
• Включите овощи, такие как брокколи, цветная капуста, сельдерей, огурцы, грибы и т. Д.
• Наслаждайтесь зелеными листовыми салатами с полезными жирами, такими как оливковое масло, дикая рыба и авокадо, которые богаты нервно-строительными и обезболивающими омега-3 жирными кислотами.
• Добавка с витаминами группы B, альфа-липоевой кислотой (ALA), витамином E и витамином B3 (ниацин), которые имеют решающее значение для здоровья нервов.
• Оживите свою жизнь, добавив в пищу противовоспалительный куркумин и куркуму. Они обладают сенсационным вкусом и могут уменьшить нервную боль.

Периферическая невропатия

Периферическая невропатия, форма нервной боли, часто поражает пациентов с диабетом.Плохая коммуникация внутри нервов может вызвать изнуряющую колющую, покалывающую и жгучую боль, в конечном итоге повреждая нервы. Диабет часто является результатом плохого питания и / или ожирения. Доктор Беркауэр может посоветовать правильные питательные вещества, продукты и упражнения, которые помогут справиться как с вашим состоянием, так и с болью.

Причина боли — периферическая невропатия?

Помимо боли, люди с периферической невропатией могут испытывать:

• Слабость мышц
• Проблемы с координацией и балансом
• Чувствительность к касанию
• Головокружение

Помимо диабета, в развитии периферической невропатии участвуют различные факторы риска, в том числе:

• Аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит или волчанка
• Фибромиалгия
• Физические травмы в результате несчастных случаев и травм
• Вирус Эпштейна-Барра, болезнь Лайма и другие хронические инфекции
• Воздействие токсичных веществ, таких как свинец и ртуть

Особенно важно вылечить периферическую невропатию раньше, чем позже, когда ее будет гораздо труднее вылечить.Обращайтесь с любыми проблемами и вопросами к доктору Берковеру, который поможет вам встать на путь благополучия.

Простые изменения в образе жизни могут избавить вас от боли

Помимо диеты, доктор Берковер рекомендует внести некоторые базовые изменения в образ жизни, например, избегать повторяющихся движений, увеличивать количество легких или умеренных упражнений и не оставаться в сидячем положении в течение длительного времени. Не забывайте регулярно вставать от компьютера, чтобы размяться и передвигаться. Доктор Берковер предлагает специальные упражнения, которые скорее помогают, чем вредят.

Если вы курите, бросьте. И не переусердствуйте с алкоголем.

Мы здесь, чтобы помочь

Узнайте, как несколько незначительных изменений могут сильно повлиять на вашу нервную боль. Если вас беспокоит боль или другие хронические заболевания, позвоните нам по телефону 954-430-9972, чтобы договориться о консультации, или запишитесь на прием к доктору Берковеру онлайн сегодня.